Molecular Biology==第六章 基因表达的调控6-1==上课.ppt

But not all genes are expressed in all cells all the time 原核基因调控机制的类型和特点 基因表达的调控主要发生在转录水平上，根据调控机制不同，可以分为负调控和正调控。 在负调控中，调节基因产物是阻遏蛋白，起阻止结构基因转录的作用。根据其作用特征又可以分为负控诱导和负控阻遏两大类。 在负控诱导系统中，阻遏蛋白不与效应物结合时，结构基因不转录；在负控阻遏系统中，阻遏蛋白与效应物结合时结构基因不转录。阻遏蛋白作用的部位是操纵区。 在正调控系统中，调节基因的产物是激活蛋白。可以根据激活蛋白的性质分为正控诱导系统和正控阻遏系统。 正控诱导系统中，效应物分子的存在使激活蛋白处于活性状态； 正控阻遏系统中，效应物分子的存在使激活蛋白处于非活性状态。 降解物对基因活性的影响 在有葡萄糖的时候，即使细菌的培养基中有乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等诱导物，相对应的操纵子也不会开启，不会产生出相对应的酶类，这叫葡萄糖效应或降解物抑制作用。 因为有葡萄糖的存在，细菌所需要的能量能够从葡萄糖得到满足，它是最方便的能源，无需开动一些不常用的基因去利用这些稀有的糖类。 细菌的应急反应 细菌处于紧急状况时，例如氨基酸全面匮乏，为了紧缩开支，将产生一个应急反应，包括产生RNA、糖、脂肪、蛋白质在内的几乎全部化学反应过程均被停止。实施这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸(pppGpp)。产生这两种物质的诱导物是空载tRNA。 当氨基酸饥饿时，便会存在大量的不带氨基酸的tRNA，它会激活焦磷酸转移酶，使ppGpp大量合成， ppGpp会关闭许多基因，当然也会打开一些合成氨基酸的基因，以应对这种紧急反应。 6.3.1.1 乳糖操纵子和负控诱导系统 大肠杆菌的乳糖操纵子（lactose operon）包括三个结构基因Z、Y和A，以及启动子、控制子和阻遏子等。 转录时，RNA聚合酶首先与启动区P结合，通过操纵区O向右转录。转录产物的每一条mRNA上都有这三个基因。转录的调控是在启动区和操纵区进行的。 IPTG（异丙基硫代半乳糖苷） 极强的诱导剂 操纵子上的基因在翻译的时候，核糖体沿着多顺反子移动，在翻译完上一个基因编码的蛋白质后，核糖体解离，小亚基不立即从mRNA上解离而是继续沿着mRNA移动，直到遇到下一个基因的起始密码，核糖体重新聚合，翻译下一个蛋白质。 lac操纵子的本底水平表达 在没有诱导物存在时，也能够合成透过酶，才能够把第一个诱导物从细胞膜外运送到细胞膜内发挥其功能。 乳糖不与阻遏物结合，真正的与之结合的是乳糖的异构体——异构乳糖，是在β-半乳糖苷酶的催化下形成的。所以这同样需要在非诱导状态下有少量的lac mRNA的合成，这种合成称为本底水平的组成型合成。 由于阻遏物与操纵区的结合不是非常紧密的，偶尔也会从操纵区上掉下来，这样就可以开始mRNA的合成。 lacI 基因产物及功能 阻遏物lacI基因的产物是由弱启动子诱导的组成型表达的。 阻遏蛋白由四个相同的亚基组成。能够与IPTG结合。 当I基因的弱启动子变为强启动子时，细胞内不能产生足够的诱导物来克服阻遏状态，整个操纵子在突变体中不可诱导。 大肠杆菌对乳糖的反应 在以甘油为碳源的培养基中，lac操纵子的本底表达使每个细胞中有1-2个两类的酶分子存在。 加入乳糖，乳糖分子可以进入细胞内变构形成异构乳糖，与阻遏物结合导致lac mRNA的表达，产生出大量的酶分子，酶分子继续作用于培养基中的乳糖，促进了此类循环。 当培养基中的乳糖消耗完后，阻遏物的合成继续进行，导致操纵子的mRNA的合成被阻止。 葡萄糖对lac操纵子的影响 如果将葡萄糖和乳糖同时加入到培养基中，大肠杆菌在消耗完葡萄糖之前是不会利用乳糖的。 葡萄糖对lac操纵子的抑制是间接的。例如一个大肠杆菌突变体，它在糖酵解途径中不能将葡萄糖-6-磷酸转化为下一个代谢中间产物，这个细菌中在有葡萄糖存在时也可以诱导lac mRNA的表达。说明不是葡萄糖而是它的某些代谢产物抑制了lac mRNA的合成。 将葡萄糖的这种效应称为分解代谢物阻遏效应。 lac操纵子中的其他问题 A基因的生理功能：抑制β-半乳糖苷酶产物的有害性衍生物在细胞内的积累，对生物的进化有积极作用。 Lac基因产物数量上的比较：三个基因的酶分子的拷贝数比例是1：0.5：0.2。不同的酶在数量上的差异是由于在翻译水平上受到调节的结果。 操纵子的融合与基因工程： lac启动子是一个很强的启动子，通过它可以使弱启动子的转录增强。从而增加蛋白质的合成量。此技术经常应用于基因工程中。 操纵子突变 操纵基因突变和顺式显性 最早通过组成型突变鉴定了操纵基因，这种突变被称为Oc，是一种组成型突变。 与发生Oc突变相邻的结构基因呈组成型表