第五章 抑癌基因 08-10-13.pptVIP

第五章 肿瘤抑制基因 (Tumor suppressor gene, TSG) ?肿瘤抑制基因（抑癌基因） 是细胞生长增殖的负调节因子，能通过抑制细胞过度生长、增殖从而遏制肿瘤形成。 抑癌基因的丢失或失活可能导致肿瘤发生。 第一节 抑癌基因研究的历史 一．抑癌基因存在的证据 1．第一个证据来自Harris的细胞融合实验 2．第二个证据来自Knudson的 “两次突变假说” 3．第三个证据是在肿瘤细胞中发现等位基因的杂合性缺失(loss of heterozygosity，LOH) 正常细胞和Hela细胞融合杂交 正常细胞 杂交细胞丢失某些染色体后 恢复恶性表型 丢失染色体重新导入肿瘤细胞 正常细胞 实验说明在正常细胞的染色体上存在有抑制细胞恶性表型或阻止肿瘤形成作用的基因。 根据Harris细胞融合实验结果假设，确定一种癌 基因在理论上需符合三个基本条件： 该恶性肿瘤的相应正常组织中该基因必须正常表达。 恶性肿瘤中该基因应有功能失活或结构改变或表达缺陷。 将该基因导入基因异常的细胞内，可部分或全部改变其恶性表型。 杂合性缺失（Loss of heterozygosity，LOH） 杂合性缺失（Loss of heterozygosity，LOH） 杂合性缺失可以用能区分两等位基因的微卫星标记或短串联重复序列 (short tandem repeat, STR)标记来检测。 二、第一个被克隆的抑癌基因-Rb基因 1971年Knudson提出了Two-hit hypothesis 和抑癌基因理论。 1978年Francke 发现染色体13q14.1特定部位缺失。 1986年 Robert Weinberg 和Thaddeus Dryia成功克隆Rb基因。 Robert Weinberg is an internationally recognized authority on the genetic basis of human cancer. He codiscovered the first human cancer-causing gene, the Ras gene, and the first known tumor suppressor gene, the RB gene. 第二节 抑癌基因的功能 抑癌基因的产物是一组细胞周期负调控蛋白。 细胞周期调控机制的核心是一组蛋白激酶。它们各自在细胞周期内特定的时间激活, 通过对相应的底物磷酸化，驱动细胞周期进程。 这些蛋白激酶的细胞周期特异性或时相性激活，依赖于一类细胞周期特异性或时相性表达、累积与分解的蛋白质。 细胞周期内特异性、时相性表达的蛋白质称为细胞周期素cyclin。 依赖cyclin的调控细胞周期的蛋白激酶称为细胞周期素依赖性激酶 cyclin-dependent kinase, CDK。 CDK和 Cyclin相结合对细胞周期一系列控制点发挥调节作用。 p53基因产物转录激活CIP1基因家族成员p21WAF1/CIP1使细胞周期G1-S期阻滞。 Rb基因产物通过CyclinD和CDK4/6复合物的激活作用与CKI的抑制作用，以磷酸化和低磷酸化状态调节细胞周期的R点。 第三节 抑癌基因与人类肿瘤 Rb基因 P53基因 INK4基因家族 CIP-KIP基因家族 PTEN基因 FHIT基因 BRCA基因 其他抑癌基因(DCC,APC,p73) 一、 Rb基因的定位及结构 Chromosome: 13q14.1 DNA: 200Kb, 27 exon mRNA: 4.7Kb Protein: 105KD (928 amino acid) 二、Rb基因的生物学特性 Rb基因是调节细胞生长分化的重要基因。 Rb磷酸化状态是调节细胞生长分化的主要形式 Rb低磷酸化状态时与E2F转录因子结合，抑制其活化基因表达的功能。 Rb高磷酸化状态时E2F解离，转录激活。 E2F与DP1蛋白形成的二聚体具有活化一系列在细胞由G1进入S期转换过程中起关键作用的基因表达。 二、Rb基因的生物学特性 调节Rb功能最重要的磷酸化事件在G1-S期交界处的R点(Restriction point) CyclinD和CDK4/6复合物使Rb磷酸化(cyclinD能够和Rb结合，CDK4/6使Rb磷酸化)，并释放出转录因子E2F, 促使细胞进入S期。 当细胞进入S期时，磷酸化状态急剧增加，并持续到G2和M期。 最近的研究表明，Rb与p21WAF1/CIP1、CDK4、TGF-β等之间也存在相互调节的关系。 三、Rb基因的失活方式 等位基因杂合性缺失(LOH) 基因突变 病毒癌蛋白(腺病毒E1A，SV40大T抗