第二章 色谱基础理论.pptVIP

色谱部分： 高效液相色谱(HPLC) 气相色谱(GC) 薄层色谱（TLC） 高效毛细管电泳（HPCE） 超临界流体萃取(SFC) 第二章 色谱基础理论（Principles of Chromatography） 2-1 概述 一、色谱发展史 1903年俄国植物学家茨维特成功分离了植物 色素叶绿素a和叶绿素b，发明了色谱法。 俄国植物学家茨维特在1906年使用的装置： 色谱原型装置，如图。 1931年，库恩分离了类胡萝卜素，色谱法引起了科学界重视；1938年，又从维生素B中分离出B6，获得当年的诺贝尔化学奖。 1941年，马丁和辛格提出液液分配色谱法，获得1952年度诺贝尔奖；同年创立了气液色谱法分析了脂肪酸同系物并提出塔板理论。 1958年，美国生物学家斯坦因和莫尔研制出氨基酸分析仪（一种低压高效液相色谱仪），获得1972年度诺贝尔化学奖。 60年代末70年代初，高效液相色谱仪成功研制。 1975年，离子色谱诞生。 2. 色谱法的基本特点是具备两个相：不动的一相，称为固定相；另一相是携带样品流过固定相的流动体（气体或液体），称为流动相。 当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 色谱法分类 液相色谱 (3)其他色谱方法 2-2 色谱流出曲线及有关术语一．流出曲线和色谱峰 二、基线 是柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值，即图中O—t线．稳定的基线应该是一条水平直线． 三、峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示，如图中B′A 四、保留值 1．死时间tM 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，如图中 O′A′。因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其流动速度将与流动相的流动速度相近． 2．保留时间tR 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间，如图O′B．它相应于样品到达柱末端的检测器所需的时间． 3．调整保留时间tR′ 某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，即 tR′ = tR-tM 保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一组份的保留时间常受到流动相流速的影响，因此色谱工作者有时用保留体积等参数进行定性检定． 4．死体积 VM 指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和．当后两项很小而可忽略不计时，死体积可由死时间与流动相体积流速F0（L／min）计算： VM = tM·F0 5．保留体积 VR  指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积。保留体积与保留时间t。的关系如下：  VR = tR·F0 6．调整保留体积VR′ 某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积，即 VR′ = VR- VM 7．相对保留值γ2.1 某组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比，称为相对保留值： 选择因子 在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准（s），然后再求其它峰（i）对这个峰的相对保留值．此时，ri/s可能大于1，也可能小于1．在多元混合物分析中，通常选择一对最难分离的物质对，将它们的相对保留值作为重要参数．在这种特殊情况下，可用符号α表示： 式中tR2′为后出峰的调整保留时间，所以这时α总是大于1的 。 五、区域宽度 色谱峰的区域宽度是组份在色谱柱中谱带扩张的函数，它反映了色谱操作条件的动力学因素．度量色谱峰区域宽度通常有三种方法： 1. 标准偏差σ 即0．607倍峰高处色谱峰宽的一半，如图中EF距离的一半。 2. 半峰宽W1/2 即峰高一半处对应的峰宽，如图中GH间的距离． 3. 基线宽度W 即色谱峰两侧拐点上的切线在基线上的截距，如图中IJ的距离．它与标准偏差。的关系是：