12-12-11高三生物《第一讲 基因工程和细胞工程》-课件.pptVIP

湖南长郡卫星远程学校 2012年下学期 制作 03 (1)目的基因的获取 　①目的基因：编码蛋白质的结构基因。 　②目的基因的获取途径 　a.从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库或cDNA文库中获取。 一、基因工程的操作步骤 　　b．人工合成目的基因：根据已知的核苷酸序列，利用原料以化学方法合成。常用的方法有反转录法和化学合成法。 　　c．利用PCR技术扩增目的基因 　　通过PCR技术可对已获取的目的基因进行扩增，以获取大量的目的基因。 (2)基因表达载体的构建(基因工程的核心) ①目的： 　　使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可遗传给下一代，并能够表达和发挥作用。 基因表达 载体组成 ② 目的基因 启动子：为RNA聚合酶识别和结合部位，驱动转录mRNA 终止子：使转录终止的特殊结构的DNA片段 标记基因：可鉴别受体细胞是否含有目的基因 ③过程 (3)将目的基因导入受体细胞 ①导入原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 ②导入过程 转化过程 受体细胞 常用方法 微生物细胞 动物细胞 植物细胞 生物种类 农杆菌转化法(主要)、基因枪法和花粉管通道法 显微注射技术 Ca2＋处理法 体细胞 受精卵 原核细胞 将目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 (4)目的基因的检测与鉴定 　　①导入检测：DNA分子杂交技术(即使用放射性同位素或荧光分子标记的DNA作探针进行检测)。DNA和DNA之间，看是否出现杂交带。 转录检测：分子杂交技术，DNA和mRNA　　　　　之间，看是否出现杂交带 翻译检测：抗原—抗体杂交，看是否出现　　　　　杂交带 ②表达检测 　　③个体生物学水平鉴定。例如：抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；对基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能是否相同。 1.从“基因表达”层面理解基因表达载体的必需元件 (1)基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因+复制原点。 ①启动子：RNA聚合酶识别和结合位点，启动转录。 ②终止子：终止转录的位点。 ③目的基因：其表达需要调控序列启动子和终止子。 拓展提升 (2)基因表达载体的构建过程 　　2.区分一个至多个限制酶切点与每种酶一个切点 　　（1）一个至多个限制酶切点：作为载体必须具有一个至多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 　　（2）每种酶一个切点：①因为某种限制酶只能识别单一切点，若载体上有一个以上的酶切点，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则进入受体细胞后便不能自主复制。②一个载体若只有某种限制酶的一个切点，则酶切后既能把环打开接纳外源DNA片段，又不会丢失自己的片段。 二、基因工程的应用 (1)植物基因工程 抗虫转基因植物　　——减轻农药对环境的污染 抗病转基因植物 抗逆转基因植物 (2)动物基因工程 提高动物生长速度 改善畜产品的品质 用转基因动物生产药物 用转基因动物作器官移植的供体 基因工程药品的生产 (3)基因治疗 把正常基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用 作用 体外基因治疗 体内基因治疗 基因工程与蛋白质工程的关系 三、细胞工程的原理和应用 动、植物细胞全能性 (1)原因： 　　生物体的每个细胞都含有发育成完整个体所必需的全部基因。 (2)全能性表现的大小： 　　受精卵的全能性最大，其次是生殖细胞，体细胞相对较小。 (3)全能性表现与细胞种类有关： 　　离体的植物体细胞的全能性在一定条件下可充分体现。离体的动物体细胞，全能性受到限制，但其细胞核仍具有全能性，需要借助卵细胞的细胞质才能体现出来。未离体细胞的全能性不能表达，只能在机体调控下定向分化。 (4)细胞的全能性是植物细胞工程技术的理论基础。