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关于常用抗癫痫药对大鼠体内Oatp2 表达的影响 论文代写网： 【摘要】目的：研究常用抗癫痫药AEDs 丙戊酸钠（VPA）、卡 马西平（CBZ）、苯妥英钠(PHT)对正常及癫痫大鼠脑、肝内Oatp2 表达的影响. 方法： 采用氯化锂匹罗卡品诱发Wistar 大鼠慢性自发性癫痫（SE），分别 予VPA ［187.5 mg/(kg ·d)］， CBZ ［125 mg/(kg ·d)］， PHT ［62.5 mg/(kg ·d)］治疗4 wk 后，采用免疫组化SABC 法检测大鼠脑、肝内Oatp2 分 布，Western Blot 及 RT PCR 方法检测Oatp2 蛋白及mRNA 的表达水平. 结果： ① 脑、肝组织中均可见Oatp2 免疫反应阳性物质，分别表达于脑微血管内皮细 胞、脉络丛上皮细胞及肝细胞；② 与正常对照相比，癫痫大鼠及AEDs 治疗大 鼠脑内Oatp2 蛋白表达均降低，而Oatp2 mRNA 表达无明显变化；③ 癫痫大 鼠肝内Oatp2 mRNA 与蛋白表达与正常对照组相比无明显变化；而使用CBZ， PHT 后大鼠肝内Oatp2 mRNA 与蛋白表达上调，使用VPA 后肝内Oatp2 mRNA 与蛋白表达下调. 结论： VPA， CBZ， PHT 均可下调脑内Oatp2 表达，而对肝 内Oatp2 的表达变化存在不同影响，AEDs 可能通过影响Oatp2 表达，影响其自 身向脑内的转运和在体内的代谢. 【关键词】有机阴离子转运多肽2 癫痫 自发反复发作 0 引言 耐药癫痫患者及动物脑内存在P 糖蛋白(Pglycoprotein， P gp)等 外排型转运体的高表达，可使癫痫靶组织内抗癫痫药(anti epileptic drugs， AEDs)浓度下降而产生耐药现象［1］. 有机阴离子转运多肽(Organic Anion Transporting Polypeptides， OATPs)是主要对底物起内向转运作用的内流型 膜转运体［2］，啮齿动物脑内主要的Oatp 亚型Oatp2 与P gp 在Wistar 鼠脑内的分布具有一致性，且痫性发作可抑制脑内Oatp2 的表达，而使P gp 表达增加［3］. 除痫性发作外，AEDs 也是影响脑内P gp 表达变化的因 素［4］. 但AEDs 是否也影响Oatp2 在脑内的表达和在体内重要代谢器官肝 内的表达呢，目前均不清楚. 故我们在正常及氯化锂匹罗卡品诱导的癫痫大 鼠模型中，研究常用AEDs （VPA， CBZ， PHT)对脑、肝内Oatp2 表达的影响. 1 材料和方法 1.1 材料氯化锂、匹罗卡品（Sigma 公司）；Oatp2 单抗（ADI 公司）；免 疫组化SABC 试剂盒（博士德公司）；PVDF 膜（Bio Rad 公司）；RIPA 裂解 液（碧云天公司）；Pro light HRP 化学发光检测试剂（北京TIANGEN 公 司）；丙戊酸钠（湖南省湘中制药有限公司）；卡马西平（上海三维制药有限 公司）；苯妥英钠（湖南省湘中制药有限公司）；小量组织/细胞总 RNA 抽提 试剂盒（上海华舜生物工程有限公司）；AMV 逆转录酶、Tag 酶（大连宝生物工 程有限公司）. 健康、成年Wistar 大鼠64 只（重庆医科大学实验动物中心提 供，体质量160~250 g），雌雄各半，饲养于12 h 12 h 光暗环境，给予标 准饲料及饮水. 1.2 方法 1.2.1 大鼠癫痫模型的制备及分组参照本组前期实验采用氯化锂匹罗卡 品（lithium pilocarpine，Sigma 公司）诱发癫痫模型［5］. 于大发作后 60 min 腹腔注射10 g/L 水合氯醛溶液(400 mg/kg)中止发作. 选取大发作后存 活动物，自造模当日起，每天观察动物自发反复惊厥发作（spontaneous recurrent seizures， SRSs）的发生情况，结果13～26 d 后，模型组均出现 SRSs，即进入癫痫期. 选取进入癫痫期动物，按使用AEDs 的不同分为：丙戊酸 钠治疗（SE+VPA）组、卡马西平治疗（SE+CBZ）组、苯妥英钠治疗（SE+PHT） 组，并设未治疗的SE 对照组，每组8 只动物；另选正常大鼠作为同比对照，分 为正常对照（NS）组，丙戊酸钠（NS+VPA）组、卡马西平（NS+CBZ）组、苯妥 英钠（NS+PHT）组，每组8 只动物. 药物处理组分别按187.5， 125， 62.5 mg/kg 予VPA，CBZ，