核酸分析设计及分析.pptVIP

常规PCR引物及杂交探针设计 Primer 3 软件介绍 /primer3/input.htm Primer-BLAST A tool for finding specific primers 定量RT-PCR SYBR Green I 是一种结合于小沟中的双链 DNA 结合染料。与双链 DNA 结合后，其荧光大大增强。 Taqman技术原理是探针分子分别标记荧光和荧光淬灭集团，利用Taq酶的5′外切酶活性，裂解双链，将探针5′端连接的荧光分子从探针上切割下来，从而发出荧光。 molecular beacon分子信标是分别在5′和3′端的荧光标记物质和荧光淬灭剂。5′和3′构成探针的茎部。形成茎 环发夹结构，使荧光剂和淬灭剂紧密接触，导致荧光淬灭。杂交使探针5′和3′端分离，淬灭剂对荧光剂的淬灭作用消失，产生荧光。 Lightcycler技术。将荧光分子和淬灭分子分别标记在两个不同的探针上，生成荧光发生探针和淬灭探针，杂交时两探针的荧光分子和淬灭分子紧密相邻，从而发生FRET使荧光淬灭。 根据mRNA序列设计RT-PCR 引物 设计需要考虑的问题： 1、引物和探针的特异性 2、引物扩增的效果 3、扩增产物在mRNA的位置 4、能否鉴别基因组DNA的污染 DNA甲基化特异性PCR引物设计 亚硫酸氢钠修饰DNA的目的是将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶，而甲基