医学分子生物学、高级生化医学分子生物学-1精选.ppt

（四）分子伴侣辅助其他生物大分子的折叠 分子伴侣并不局限于蛋白质，也可以是脂分子伴侣，如磷脂乙醇胺是乳糖透性酶折叠所必需的。 分子伴侣所辅助的分子也不局限于蛋白质，如DNA 分子伴侣，RNA分子伴侣。　 　 * 五、膜蛋白的折叠研究具有较大的挑战性 膜蛋白质在磷脂膜中的二级结构可以全部是α-螺旋结构，也可以全部是β-片层结构，如通道蛋白。 * 膜蛋白具有重要功能 细胞信号的接受和转导 物质转运 能量转换 细胞间识别 病毒和细菌感染 肿瘤发生 细菌耐药 * 为什么膜蛋白折叠所知甚少？ 细胞膜蛋白分离或表达膜蛋白有一定困难 膜蛋白体外变性-复性要在疏水环境进行，研究难度大。 到目前为止，只有几种膜蛋白成功进行了变性-复性实验。 * α-螺旋跨膜蛋白折叠的“两步模型” 1.形成约25个氨基酸的疏水α-螺旋，插入膜中。 2.在膜内疏水条件下，内部α-螺旋相互作用，引导蛋白质趋向天然结构。 * 膜内疏水环境使得肽链主链上的极性基团N-H和C=O只能相互形成氢键，有利于α-螺旋的形成和稳定。 对于只是部分插入到膜中的外周蛋白的折叠，一般认为在插入之前，蛋白质要进行部分折叠。 * 通道蛋白（porin） 由多个β-片层在外膜形成β-桶状结构的通道，能够辅助较小极性分子进入细胞质。 β-桶状结构的疏水残基侧链位于与脂质双分子层直接接触的区域，极性残基的侧链远离疏水的脂质双分子层，与空腔的水形成氢键。 * 通道蛋白可由信号肽引导，以成熟的蛋白质形式分泌到细胞质中，然后插入到膜。该过程包括了部分的折叠和与其他链的相互作用。 体外实验也证明通道蛋白可以在脂质双分子层中完全重折叠。 * 第二节 蛋白质的定位 * * 蛋白质的定位 概念：蛋白质合成后被定向输送到发挥作用 的靶区域的过程称为蛋白质的靶向输送 （protein targeting)。 蛋白质的靶向输送是由蛋白质上所携带的定 位信号决定的。 * 一、蛋白质分子上携带不同的定位信号 20世纪70年代，Blobel G 提出“信号肽假说”即所有靶向输送的蛋白质的一级结构中都存在定位信号，引导蛋白质转移到适当的细胞靶部位。 1999年获诺贝尔生理学或医学奖。 * 定位信号：定位信号是决定蛋白质靶向输送的关键因素，引导蛋白质转移到适当的细胞靶部位。 信号肽序列：是肽链N-末端长度为13-36个氨基酸的序列。 * 靶向输送蛋白 信号序列或成分 分泌蛋白 信号肽 内质网腔蛋白 信号肽，C端-Lys-Asp-Glu-Leu-COO-(KDEL序列) 线粒体蛋白 N端靶向序列（20～35氨基酸残基） 核蛋白 核定位序列（-Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val-，SV40 T抗原） 过氧化体蛋白 -Ser-Lys-Leu-（PST序列） 溶酶体蛋白 Man-6-P（甘露糖-6-磷酸） 靶向输送蛋白的信号序列或成分 * 二、不同的定位信号引导蛋白质转运到不同的细胞部位 线粒体中蛋白质由胞质游离核糖体合成并靶向输送到线粒体中 细胞核蛋白的入核和出核由核定位信号和核输出信号决定 成熟的、完全折叠的蛋白质才能被转运到过氧化物酶中 分泌型蛋白质的靶向输送起始于粗面内质网 膜蛋白的插入具有方向性 * （一）线粒体中的蛋白质由胞质游离核糖体合成并靶向输送到线粒体中 1.线粒体蛋白质的N-末端带有定位信号 2.蛋白质进入线粒体需要TOM和TIM复合体 3.线粒体蛋白质的输送模型具有保守型 * 线粒体蛋白的靶向输送 * （二）细胞核蛋白的入核和出核是由核定位信号和核输出信号所决定 蛋白质的核定位信号（nuclear localization signal,NLS）决定了蛋白质在细胞核内外的转运。NLS由4-8个氨基酸残基组成，富含带正电荷的赖氨酸，精氨酸及脯氨酸。可位于肽链不同部位，完成定位后不被切除。 * 核输出信号（nuclear export signal,NES）负责把蛋白质从细胞核内转运至细胞质。 NES含有一段10个氨基酸残基序列，含有一组保守亮氨酸组合。 蛋白质可同时含有NLS和NES。 * 2. 蛋白质的出核和入核需要G蛋白提供能量 蛋白质穿过核孔过程中，Ran为核蛋白转 运提供能量。Ran是G蛋白单体，具有 GTP酶活性。 在Ran-GTP中，Ran催化GTP水解产生Ran- GDP。 * 细胞核蛋白的靶向输送 * （三）成熟的、完全折叠的蛋白质才能被转运到过氧化物酶中 过氧化物酶基质中的蛋白质以及膜蛋白都是在细胞质游离核糖体上合成的。 进入过氧化物酶体的蛋白质都是在折叠好之后再进行转运的。 * （四）分泌型蛋白质的靶向输送 起始于粗面