色谱(张华屏).pptVIP

层析技术 主要内容 概述 层析技术分类 层析技术的原理及具体应用 结果分析(色谱图) 定性和定量检测方法 重点内容 层析的概念 层析技术的分类(按分离机制) 分配系数K 空间排阻色谱和离子交换色谱的应用 概述 1906年由俄国植物学家Tsweet创立 植物色素分离见图示 图示 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 用途（举例说明） 分析混合物的问题，苯系物包括苯、甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、奈、乙苯等，共存在于同一体系时，用什么方法可以测定其中一种或几种组分的含量？ 层析最大的特点就是能将一个复杂的混合物分离为各个有关的组分，并逐个检测出来。能较好的分离物理常数相近、化学性质类似的同系物和异构体。 层析法的分类 分类： 1．按两相分子的聚集状态分： 续前 3．按分离机制分： 层析法的原理 一、分配系数K 二、基本类型色谱法的分离机制及应用 一、色谱过程是被分离组分在两相中的“分配”平衡过程. 以吸附色谱为例见图示 吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 →反复多次洗脱→被测组分分配系数不同→ 差速迁移 → 分离 图示 分配系数的微小差异→吸附能力的微小差异 微小差异积累→较大差异→吸附能力弱的组分先流出； 吸附能力强的组分后流出back 在不同类型的色谱过程中, 色谱的分离机制各不相同，分别形成吸附平衡、分配平衡、离子交换平衡和渗透平衡等. 续前 分配系数K（平衡常数）：指在一定温度和压力 下，组分在色谱柱中达分配平衡后，在固定相与 流动相中的浓度比（色谱过程的相平衡参数） 二、基本类型色谱法的分离机制及应用 （一）吸附色谱法 （二）分配色谱法 （三）空间排阻色谱法 （四）离子交换色谱法 (五) 亲和色谱法 （一）吸附色谱法( adsorption chromatography ) 要求： 固定相→吸附剂（硅胶或AL2O3） 具表面活性吸附中心 分离机制：见图示 图示 分离机制： 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离 吸附→解吸→再吸附→再解吸→无数次洗脱→分开 back （二）分配色谱法( partition chromatography ) 要求： 固定相→机械吸附在惰性载体上的液体 流动相→必须与固定相不为互溶 载体→惰性，性质稳定， 不与固定相和流动相发生化学反应 分离机制见图示 图示 分离机制 利用组分在流动相和固定相间溶解度差别实现分离 连续萃取过程 back （三）空间排阻色谱法 要求： 固定相→多孔性凝胶 流动相→水——凝胶过滤色谱 流动相→有机溶剂——凝胶渗透色谱 分离机制见图示 （四）离子交换色谱法 要求： 固定相→离子交换树脂 流动相→水为溶剂的缓冲溶液 被分离组分→离子型的有机物或无机物 图示 分离机制： 依据被测组分与离子交换剂交换能力（亲和力） 不同而实现分离 back 图示 色谱法的特点 优点：“三高”、“一快”、“一广” 缺点： 应用 ⑴脱盐：高分子（如蛋白质、核酸、多糖等）溶液中的低分子量杂质，可以用凝胶层析法除去，这个过程称为脱盐。本法操作简便、快速, 蛋白质和酶类等在脱盐过程中不易变性。 ⑵用于分离提纯：凝胶层析法已广泛用于酶、蛋白质、氨基酸、多糖、激素、生物碱等物质的分离提纯。凝胶对热原有较强的吸附力，可用来去除无离子水中的致热原,制备注射用水。　 　⑶测定高分子物质的分子量：用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内，在同一条件下层析，记录每一分钟成分的洗脱体积，并以洗脱体积对分子量的对数作图，在一定分子量范围内可得一直线，即分子量的标准曲线。测定未知物质的分子量时，可将此样品加在测定了标准曲线的凝胶柱内洗脱后，根据物质的洗脱体积，在标准曲线上查出它的分子量。 ⑷高分子溶液的浓缩：通常将SephadexG-25或50干胶投入到稀的高分子溶液中，这时水分和低分子量的物质就会进入凝胶粒子内部的孔隙中，而高分子物质则排阻在凝胶颗粒之外，再经离心或过滤，将溶胀的凝胶分离出去，就得到了浓缩的高分子溶液。 阳离子交换树脂 R