实验一 培养基制备技术.pptVIP

临床微生物学与检验 临床微生物学实验室须知 ★进入实验室必须穿白大褂； ★只带必要的文具和讲义； ★实验室内禁止饮食、吸烟，喧哗； ★避免有菌材料污染，如发生污染，应立即 报告老师； ★用过的有菌器材必须放在消毒缸内； ★实验完毕，必须清洁实验台和实验室； ★离室前，应用肥皂水洗手。 微生物学实验程序 ★实验课前认真做好预习; ★实验时认真做好每个实验； ★实验后如实写出实验报告。 实验报告 一、实验原理 二、主要试剂 三、主要操作器材 四、主要操作规程 五、实验结果 六、结论 七、讨论 实验一 培养基制备技术 天平的使用（物理天平） ★调水平、调平衡 ★物体放左盘，砝码放右盘 ★遵从由大到小的顺序选用砝码 ★砝码总质量加游码所示质量为物重 ★质量小于1克的物体，可直接用游码称量 电子天平 开机后调零 三用水箱 三用恒温水箱为“水浴锅”，“水温箱”，“煮沸消毒箱”三种用途的综合产品，可用于蒸馏，干燥，浓缩及恒温加热化学药品，生物制品，生化实验，恒温培养，以及对器械进行煮沸消毒之用。 使用温度范围：室温-100℃ 超净台 ★每次使用超净工作台时，实验人员应先开启超净工作台上的紫外灯，紫外照射20分钟后使用。 ★开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面。 ★整个实验过程过程中，实验人员应按照无菌操作规程操作。 ★实验结束后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照射15分钟。 高压蒸汽灭菌法 ★高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。 ★原理：水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高，当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。 培养基 培养基的种类和选择: 培养基（culture medium） 是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 一、培养基的主要成分及其作用 （一）营养物质 1.蛋白胨--氮源 2.肉浸液及牛肉膏--氮源和碳源 3.糖（醇）类--碳源，鉴别细菌 4.血液--辅酶、血红蛋白，鉴别细菌 5.鸡蛋与动物血清--特殊培养基 6.无机盐类 7.生长因子 （二）水分 不含杂质的蒸馏水或离子交换水 （三）凝固物质 最合适的凝固剂是琼脂 100℃融化，45℃以下凝固。 （四）抑制剂---选择性培养基 （五）指示剂---鉴别培养基 二、培养基的分类 按性状分为： 固体培养基（琼脂1.5—2.0% ） 半固体培养基（琼脂0.3—0.5% ） 液体培养基（无琼脂） 按用途分为： 基础培养基（肉汤、普通琼脂平板） 营养培养基（血平板、巧克力平板） 鉴别培养基（KIA、MIU培养基） 选择培养基（SS、高盐甘露醇平板） 增菌培养基（葡萄糖肉汤） 特殊培养基（厌氧培养基……） 1．基础培养基 含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤（broth），主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。 2．营养培养基（nutrient medium） 最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等 3．鉴别培养基（diferential medium） 糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（KIA）、伊红-镁蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU）培养基等。 4．选择培 （selective medium） SS琼脂使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到 5．特殊培养基 （special medium） 疱肉培养基、 巯基乙醇酸纳培养基 培养基的选择 根据标本来源和可能存在的病原菌，确定选用各种分离培养基。伊红美蓝/麦康凯用于筛选革兰阴性杆菌。 培养基的选择 从血液、骨髓中分离病原菌用血液增菌培养基 培养基 制备程序： 称量－溶化－调整pH值 －澄清过滤－高压灭菌－ 分装－质量检查－保存 注意事项： 配置培养基必须在玻璃容器中进行； 溶