凝胶介质基本操作层析特点DESIGN一.PPTVIP

一、概述 二、基本原理 三、凝胶介质 四、基本操作 五、层析特点 一、概述 层析Chromatography(色谱)：利用混合物中各组分的物理化学性质间的差异(溶解度、分子极性、分子大小、分子形状、吸附能力、分子亲合力等) ，使各组分在支持物上集中分布在不同区域，借此将各组分分离。 层析法进行时有两个相，一个相称为固定相(Stationary phase )，另一相称为流动相(Mobile phase )。由于各组分所受固定相的阻力和流动相的推力影响不同，各组分移动速度也各异，从而使各组分得到分离。 1903（1906）年，Michael Tswett提出色谱法 1931年，Kuhn采用柱色谱分离了类胡萝卜素 1941年，Martin和Synge提出分配色谱法 1944年，Martin等又提出纸色谱法 1952年，Martin和James发明了气液色谱法 1955年，第一台商品气相色谱问世，标志着现代色谱分析的建立 1956年，Stahl系统研究了薄层色谱法(TLC) 色谱历史 1958年，Stein和Moore研制出氨基酸分析仪，确定了核糖核酸的分子结构 1967年，Horvvath和Huber等研制了高效液相色谱(high-performanceliquid chromatography,HPLC)仪 1975年，Small等提出离子色谱     20世纪80年代，超临界色谱 20世纪90年代，毛细管电泳（1809年Reŭss第一次电泳实验） 21世纪，联用技术、大分子色谱分离、制备色谱可望取得更大的发展 按层析的机理分类： 吸附层析：利用吸附剂表面对不同组分吸附性能的差异，达到分离鉴定的目的。 　　 分配层析：利用不同组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，使之分离。 　　 离子交换层析：利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同。 　　 凝胶层析：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。 （1）定义： 凝胶层析技术是指以各种具有网状结构的凝胶颗粒为固定相，根据流动相中所含各种组分的分子大小不同而达到物质分离目的的一种层析技术。 凝胶层析 凝胶层析是六十年代初发展起来的一种快速而 又简单的分离分析技术，凝胶层析法又被称分子 排阻层析法、尺寸排阻层析法、体积排阻层析法、 分子筛层析法等等。 （2）分类 依据流动相不同分类 流动相为有机溶剂： 凝胶渗透层析（GPC）。 流动相为水： 凝胶过滤层析（GFC） （3）应用范围 凝胶层析设备简单、操作方便。样品回收率高、实验重复性好、特别是不改变样品生物学活性等优点，因此广泛用于蛋白质(包括酶)、核酸、多糖等生物分子的分离纯化，同时还应用于蛋白质分子量的测定、脱盐、样品浓缩等。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。 二、基本原理 （1） 分子筛效应 一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，色谱柱中各分子在柱内同时进行着两种不同的运动： a 垂直向下的移动 b 无定向的扩散运动（布朗运动）。 大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。 小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶颗粒内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒内。 如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。其中具有多孔的凝胶就是分子筛。 （2）使用范围 各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。分子直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。 综上所述，在凝胶色谱中会有三种情况： 1、分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙； 2、分子