植物组织培养课件第6章B-植物脱毒.ppt

植物脱毒技术 一、植物病毒 二、脱毒技术 三、脱毒效果鉴定 四、无毒种苗繁殖 2 植物病毒的危害： 病毒是无性繁殖作物品种退化的主要因素 产量降低（葡萄、马铃薯） 品质下降（草莓、马铃薯） 影响花卉的观赏价值（百合花畸形、变色） 3 病毒特点： 一旦染毒，终生带毒；且难用药剂控制； 4 传播方式： 体外：自然界无性繁殖；虫媒传播；伤口传播 体内：维管组织；胞间连丝 二、 脱毒技术 1 获得无病毒繁殖体的方法： ①严格检疫，引进无毒种苗； ②筛选无毒个体； ③组培方法脱毒，培育无毒株。 2 脱毒方法 脱毒：用人为的方法将植物体内的病毒去掉 的一种方法。 方法： 热处理法； 茎尖培养法； 微体嫁接 （1） 热处理法 原理：高温钝化病毒 母体植株不受伤害 评价：利用了病毒的热敏性 i、并非所有病毒都有热敏性； ii、热处理影响母体植株存活率； （2） 茎尖培养脱毒： Morel最早于1952 年得到大丽花脱毒苗，目前唯一行之有效的脱毒方法。 I 原理： 感染病毒在植株的体内分布有不均匀性，病毒的数量随植株部位及年龄而异，在根尖和茎尖病毒含量很少或不含病毒。 在满足培养材料成苗的前提下，茎尖越小越好 注：关于茎尖脱毒培养 A 行之有效的脱毒方法，与热处理结合效果更佳 热处理+茎尖培养 B 对难处理的植物，可结合微体嫁接等方法，获得无毒种苗 茎尖+实生苗砧木 诊断目的植株是否带有病毒 母体材料预处理 茎尖分生组织培养再生植株 再生苗脱毒效果的检测 快繁脱毒苗 保存、推广脱毒苗 三 脱毒效果的鉴定 1 目的：用热处理方法和茎尖培养得到的植株，不一定都是无病毒植株，必须对得到的植株进行严格的鉴定，以确定真正的无病毒植株 2 方法： ①指示植物法 ②血清法 ③电镜检测 ④核酸检测法 ①指示植物检测法 指示植物：指对某些病毒特别敏感，一旦感染后很快就出现特有病斑的植物 特点： 不同指示植物对不同病毒敏感性不同 ②抗血清(antisemm)鉴定法 利用了“血清反应”，用已知抗血清可以鉴定未知病毒“抗原” 特点：特异性高；测定速度快，一般几小时甚至几分钟就可以完成； ③电子显微镜(elecmc microscope)检查法 采用电子显微镜可以直接观察、检测有无病毒的存在，了解病毒颗粒的大小、形状和结构，又可以鉴定病毒的种类。 特点：灵敏度高；能在植物粗提取液中定量测定病毒；但需一定的设备和技术 3 病毒鉴定工作贯穿脱毒苗繁殖的整个过程 ①脱毒前鉴定母体植株是否为病毒感染； ②经过茎尖培养的再生苗是否确认已脱毒； ③炼苗移栽后的商品苗是否重新染毒； 四 无毒种苗的繁殖 组培室----网室-----隔离区----大田 注：培养室保留无性繁殖系 思考题： 某地区的一种马铃薯经多年的种植后，植株变的矮小，产量和品质都下降，怀疑是由病毒所至。请你设计一个病毒的鉴定和脱毒的技术方案。 要点： 1）采样：样本预处理，获得无菌系用于实验; 2）检测：指示植物法(证实由病毒引起减产)； 3）脱毒：热处理＋茎尖培养； 4）病毒检验：抗血清检验； 5）扩繁：茎芽增殖及生根。 注：病毒检测工作应穿插于整个脱毒过程之 中，进入生产前应严格鉴定 植物病毒鉴定中最有用的方法之一 利用抗原与抗体特异反应的特性，用已知病毒的抗血清来鉴定未知病毒的种类。 * * 1、病毒在植物体内的分布 1943年，White首先发现已感染烟草花叶病毒的烟草植株。 1948—1949年，Holmes和Masset等证实病毒的分布随植株不同部位和年龄而异。 一、植物病毒 ◆老叶和成熟组织中病毒含量高 ◆幼嫩和未成熟组织及器官中病毒含量较低 ◆根尖、茎尖约0.1~1mm区域中几乎不含病毒 ◆向附近细胞转移 ◆由表面向韧皮部转移 生产无病毒种苗，防止品种退化 5 植物脱毒的意义 便于运输 常规的块根、块茎等，体细胞大、含水量高，包装、运输十分不便。 离体繁殖的种苗体积小，易携带，运输十分方便。 以马铃薯为例子： 按一亩地4000株计算，常规薯4000个重200kg（每个50g），若用试