ampkpparαscad信号途径对心肌肥大的调控研究word格式论文.docxVIP

ii目 录中文摘要 I[Abstract]…………………………………………………………………………………...III引言1第一章敲低短链酰基辅酶 A 脱氢酶对心肌细胞的影响51. 前言 ……………………………………………………………………………………...52．材料与方法………………………………………………………………………………62.1 实验材料 62.1.1 实验动物 62.1.2 主要药物与试剂 62.1.3 主要实验仪器和器材 72.1.4 主要试剂的配制 82.2 主要实验方法 92.2.1 乳鼠心肌细胞原代培养 92.2.2 心肌细胞表面积测定 102.2.3 心肌细胞游离脂肪酸的含量测定 102.2.4 心肌细胞短链酰基辅酶 A 脱氢酶活性测定 11心肌细胞总 RNA 提取以及 Real-time-PCR 13心肌细胞总蛋白的 Western blot 检测 16SCAD siRNA 干扰 182.2.8 实验分组 192.2.9 统计学分析 203. 实验结果………………………………………………………………………………..203.1 乳鼠心肌细胞原代培养和鉴定 203.2 siRNA 干扰序列的筛选 213.3 PE 和干扰序列 1186 构建体外心肌细胞肥大模型 223.3.1 对心肌细胞表面积及脂质代谢的影响 223.3.2 目的基因的表达与 SCAD 酶活性变化 244. 讨 论……………………………………………………………………………………25第二章心肌肥大中 PPARα 对 SCAD 的调控271. 前 言……………………………………………………………………………………272. 材料与方法……………………………………………………………………………..282.1 实验材料 282.1.1 实验动物 282.1.2 主要药物与试剂 282.1.3 主要实验仪器和器材 292.1.4 试剂的配制 302.2 主要实验方法 302.2.1 乳鼠心肌细胞原代培养 302.2.2 心肌细胞表面积测定 302.2.3 心肌细胞游离脂肪酸的含量测定 302.2.4 心肌细胞短链酯酰辅酶 A 脱氢酶活性测定 312.2.5 用 RT-PCR 方法检测心肌细胞中目的基因的表达 312.2.6 用 Western blot 方法检测心肌细胞中目的基因的表达 312.2.7 实验分组 312.2.8 统计学分析 313. 实验结果………………………………………………………………………………..313.1 非诺贝特对 PE 刺激后心肌细胞表面积及游离脂肪酸含量的影响 313.2 非诺贝特对 PE 刺激后 PPARα、SCAD 表达及 SCAD 酶活性的影响 333.3 非诺贝特对 1186 敲低 SCAD 基因的心肌细胞保护作用 344. 讨 论……………………………………………………………………………………37 第三章 心肌肥大中 AMPK 对 PPARα/SCAD 信号途径的调控39 1. 前 言……………………………………………………………………………………392. 材料与方法……………………………………………………………………………..402.1 实验材料 402.1.1 实验动物 40ii2.1.2 主要药物与试剂 402.1.3 主要实验仪器和器材 412.1.4 试剂的配制 422.2 主要实验方法 422.2.1 乳鼠心肌细胞原代培养 422.2.2 心肌细胞表面积测定 422.2.3 心肌细胞游离脂肪酸的含量测定 422.2.4 心肌细胞短链酯酰辅酶 A 脱氢酶活性测定 422.2.5 用 RT-PCR 方法检测心肌组织中目的基因的表达 422.2.6 用 Western blot 方法检测心肌细胞中目的基因的表达 432.2.7 实验分组 432.2.8 统计学分析 433. 实验结果………………………………………………………………………………..433.1 AICAR 对心肌细胞表面积及游离脂肪酸含量的影响 433.2 AICAR 对 p-AMPKα、PPARα 和 SCAD 表达及 SCAD 酶活性的影响 444. 讨 论……………………………………………………………………………………46总结与展望 47参考文献 48附录一英文缩略词表 53附录二在学期间完成的论文 55致 谢 56iiiivAMPK/PPARα/SCAD 信号途径对心肌肥大的调控研究中文摘要目的：研究短链酰基辅酶 A 脱氢酶（short-chain acly-coenzyme