ang2sirna质粒壳聚糖磁性纳米微粒干预人恶性黑色素瘤细胞的体外研究word格式论文.docxVIP

英文缩略词表 ……………………………………………………………………2中文摘要 …………………………………………………………………………3Abstract …………………………………………………………………………5 一、前言 …………………………………………………………………………7二、实验内容 ……………………………………………………………………9 1、材料与试剂……………………………………………………………………92、实验方法………………………………………………………………………113、结果与分析……………………………………………………………………174、讨论……………………………………………………………………………225、结论……………………………………………………………………………25 参考文献 …………………………………………………………………………24 综述 ………………………………………………………………………………28 综述参考文献 ……………………………………………………………………31 致 谢………………………………………………………………………………332英文缩写英文全称英文缩略词表中文全称及注释AngAngiopoietin促血管生成素Ang1 Ang2 RNATie2Angiopoietin-1 Angiopoietin-2 Ribonucleic acidTyrosine KinaseReceptors 2促血管生成素1促血管生成素2 核糖核酸 促血管生成素受体2siRNAsmall interferingRNA小干扰 RNARNAiCSRNA interferenceChitosanRNA干扰壳聚糖DEPCdiethyl pyrocarbonate二乙基焦磷酰胺DNADeoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸dsRNAdouble-stranded RNA双链 RNAEBethidium bromide溴化乙锭DMSOdimethyl sulfoxide二甲基亚砜mRNAmessenger ribonucleic acid信使核糖核酸PBSphosphate buffered solution磷酸盐缓冲溶液VEGFvascular endothelial growth factor血管内皮生长因子GADPHglyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 叶绿体甘油醛-3-磷酸脱氢酶HUVECshuman umbilical vein endothelial cell人脐静脉内皮细胞pGenesil-3pGenesil-3pGenesil-3 质粒RT-PCRReal Time PCR实时荧光定量 PCRCtCycle threshold循环数3Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒干预人恶性黑色素瘤细胞的体外研究 摘要目的：制备Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒，利用其RNA干扰作用，沉 默人恶性黑色素瘤细胞Ang2基因的表达，体外研究其对人恶性黑色素瘤细胞中 Ang2基因表达的抑制效率，为后期进一步进行裸鼠恶性黑色素移植瘤的血管生成 和肿瘤生长的体内靶向性干预实验奠定基础，为Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米 微粒在肿瘤靶向基因治疗中的应用提供实验依据。方法：1.制备Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒。2.Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒体外转染人恶性黑色素瘤细胞。3.利用倒置荧光显微镜观察人恶性黑色素瘤细胞红色荧光蛋白表达情况，细 胞计数并分析转染效率。4.实时荧光定量PCR检测人恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因的表达量，进而得 到RNAi沉默Ang2基因表达的效率。结果：1、成功制备Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒。2、利用倒置荧光显微镜观察，转染成功的人恶性黑色素瘤细胞发出红色荧 光。3、当质粒与壳聚糖磁性纳米微粒质量比为1:100时，Ang2-siRNA质粒壳聚糖 磁性纳米微粒转染人恶性黑色素瘤细胞的效率最高，可达61.17%。4、实时荧光定量PCR结果：Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒可有效沉默 人恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因的表达，其Ang2基因表达抑制效率可达到59.56%（P0.05）。结论：Ang2-siRNA质粒壳聚糖磁性纳米微粒能以较高的转染效率在体外干 预人恶性黑色素瘤细胞，且能抑制恶性黑色素瘤细胞Ang2基因的表达，为后期进 一步进行裸鼠恶性黑色素移植瘤的血管生成和肿瘤生长的体内靶向性干预实验4奠定基础，提供实验依据。关键词：Ang2，质粒，RNAi，壳聚糖磁性纳米微粒，恶性黑色素瘤5Interference of Human Malignant Melan