cr影响nit1细胞胰岛素分泌的调控通路研究word格式论文.docxVIP

INS/IGF-1信号通路及其自身的去乙酰化酶活性，抑制了FOXO1的活性，从而降低了FOXO1下游衰老相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达，并同时提高了组织细胞对胰岛素的敏感性，减少了β细胞因过度分泌胰岛素而引起的凋亡，最终延缓了β细胞的衰老。因此我们猜测在哺乳动物胰岛β细胞，CR通过SIRT1进而调节INS/IGF-1通路的PI3K-AKT-FOXO因子，影响β细胞倍增及胰岛素分泌功能，并且参与胰岛素抵抗与T2DM的发生发展。本实验通过热量摄入限制（CR）诱导NIT-1细胞的SIRT1高表达，延缓了胰岛β细胞倍增时间，从体外实验进一步检测胰岛β细胞中SIRT1与INS/IGF-1通路主要因子的相关性，并通过图像采集和分析软件对其表达水平做进一步分析，探讨热量摄入限制影响NIT-1细胞胰岛素分泌的调控通路，为T2DM发病机制提供进提供新的实验依据和理论基础。内容和方法：1．NIT-1细胞正常培养、CR培养至指数生长期及在CR培养同时用SIRT1的抑制剂尼克酰胺(NIC)对NIT-1细胞进行干扰。2．用免疫细胞化学、RT-PCR实验方法检测SIRT1及INS/IGF-1通路主要因子PI3K、AKT、FOXO1的蛋白及mRNA表达水平变化。3.用放射免疫及免疫细胞化学方法检测胰岛素的分泌及表达量的变化，用细胞计数法检测细胞倍增时间的变化。结果：1．CR可使NIT-1细胞倍增时间延长及胰岛素分泌减少。2．CR可以使NIT-1细胞的SIRT1高表达并影响INS/IGF-1信号通路。3．用SIRT1的抑制剂诱导后，可以逆转上述CR的作用。结论：1．能量摄入限制可能通过高表达SIRT1参与了对INS/IGF-1信号通路的调控。2．能量摄入限制延长NIT-1细胞倍增时间，改善了胰岛素分泌功能。关键词：能量摄入限制(CR)；SIRT1；INS/IGF-1通路；2型糖尿病(T2DM)AbstractAsearlyasin1930s,someresearchershadstudiedtheeffectonrodentswhichwererestrictedfoodandfoundthatitcouldextendtheirlifespan.Sincemaincomponentoffood whichwasrestrictedwascalorie,researcherscalleditascalorierestriction(CR).In2000,LinSJ etalfoundthatitcouldextendsaccharomyceticlifespanfor30%-40%,whentheglycoseinmediumwasreducedfrom2%to0.5%ormore.WeissEPetalfoundthatCRcouldalsoincreaseinsulinsensitivityoftissue,decreaseinsulinresistanceandthendecreaseinsulinsecretionofbetaCellofislet.ItplayedanimportantroleinpreventionandtherapyofT2DM.Clinicepidemiologicsurveyshowedthatwhenageswereincreased,sugartolerancewas decreasedwithmorbidityrateofT2DMandimpairedglucosetoleranceincreasing.Animalexperimentalsoshowedthatinmousemodelwhichhighfatdietinduced,βcellsenescenceparticipated inmorbidity of T2DM whichdiet induced.Therefore, βcell senescenceparticipatedinoccurrenceanddevelopment.But,themechanismstillremainedunclear.Silentinformationregulator2(SIR2)wasanimportantgenewhichregulatedagingproceedingofbiosystem.Itwasfoundfirstinyeastcell,andparticipatedinmatingtypegenesilencing,telomeregenesilencing,andrDNArecombination,tomaintaingenicstability.Ithadimportantrelationshipwithsubstancemetabolismandlon