cs2致男雄性下丘脑垂体性腺轴功能紊乱机制初探及no干预作用word格式论文.docx

结果：垂体前叶细胞呈圆形，折光性较强，成纤维细胞生长明显，原代培养后期成纤维细胞已为主要细胞。免疫细胞化学染色结果显示，LH和FSH免疫阳性细胞胞浆呈棕黄色。结论：体外培养的垂体细胞中有多种细胞的生长，反复差速贴壁法能较好的去除成纤维细胞，提高垂体前叶细胞的纯度，但LH和FSH免疫反应阳性细胞比例较低。第四部分CS2致雄性大鼠下丘脑-垂体-性腺轴功能紊乱机制的研究一、CS2对大鼠下丘脑-垂体-性腺轴激素和激素受体mRNA表达水平的影响以及NO的干预作用目的：探讨CS2对大鼠下丘脑-垂体-性腺轴激素和激素受体mRNA表达水平的影响以及NO的干预作用方法：对体外培养的大鼠垂体前叶细胞进行染毒，共设6 个染毒组，分别为对照组、3 个不同浓度CS2染毒组（2.5、5.0、10.0?mol/mlCS2）、SNP干预组（10.0?mol/ml CS2+20?mol/mlSNP）和L-NMMA干预组（10.0?mol/mlCS2+50 ?mol/mlL-NMMA），支持细胞的6个染毒组分别为对照组、3个不同浓度CS2染毒组（1.25、2.50、5.00 ?mol/mlCS2）、SNP干预组（5.00?mol/mlCS2+10?mol/mlSNP）和L-NMMA干预组（5.00?mol/mlCS2+25?mol/mlL-NMMA），采用Real-timePCR对垂体前叶细胞中GnRHRmRNA和睾丸支持细胞中FSHR、ABP、INH mRNA表达水平进行检测。结果：垂体前叶细胞中GnRHRmRNA表达水平在10.0?mol/mlCS2染毒时显著降低（P0.05），NOS抑制剂L-NMMA可拮抗CS2的作用，使GnRHRmRNA表达水平显著增高（P0.05）；在睾丸支持细胞中，不同浓度CS2染毒组与对照组比较，ABP和INHamRNA表达水平没有明显变化（P0.05），5.0 ?mol/mlCS2染毒组FSHR 和INH?bmRNA表达水平显著降低，INH?amRNA表达水平显著增高（P0.05）；NO供体SNP干预组与5.0 ?mol/mlCS2染毒组比较，INHamRNA表达水平显著增高（P0.05），ABP、FSHR、INH?a和INH?bmRNA表达水平改变均不明显（P0.05）；NOS抑制剂L-NMMA干预组与5.0?mol/mlCS2染毒组比较，ABPmRNA表达水平显著增高（P0.05），FSHR、INHa、INH?a和INH?bmRNA表达水平改变均不明显（P0.05）。结论：CS2可抑制垂体前叶细胞中GnRHR、支持细胞中FSHR和INH?b 的表达，通过抑制HPGA中多种激素和激素受体的合成，导致HPGA功能紊乱，CS2对垂体GnRHR的抑制作用与NOS活性有关。二、CS2对大鼠下丘脑神经元、垂体前叶细胞和睾丸支持细胞内cAMP/cGMP的影响以及NO的干预作用目的：探讨CS2 对大鼠下丘脑神经元、垂体前叶细胞和睾丸支持细胞内cAMP/cGMP的影响以及NO的干预作用。方法：对体外培养的大鼠下丘脑神经元和垂体前叶细胞进行染毒，共设6 个染毒组，分别为对照组、3个不同浓度CS2染毒组（2.5、5.0、10.0 ?mol/mlCS2）、SNP 干预组（10.0 ?mol/mlCS2+20 ?mol/ml SNP）和L-NMMA干预组（10.0?mol/mlCS2+50 ?mol/ml L-NMMA），支持细胞的6 个染毒组分别为对照组、3 个不同浓度CS2染毒组（1.25、2.50、5.00 ?mol/mlCS2）、SNP干预组（5.00?mol/mlCS2+10 ?mol/ml SNP）和L-NMMA干预组（5.00?mol/mlCS2+25?mol/mlL-NMMA），采用酶联免疫吸附试验对下丘脑神经元、垂体前叶细胞和睾丸支持细胞中cAMP和cGMP水平进行检测。结果：下丘脑神经元中，各染毒组cAMP 水平变化不明显（P0.05），cGMP 水平在10.0?mol/mlCS2染毒组显著降低，SNP可拮抗CS2的作用，使cGMP水平显著增高（P0.05）；垂体前叶细胞中cAMP和cGMP水平不随CS2染毒浓度的增加而发生改变（P0.05），但L-NMMA干预组与10.0 ?mol/mlCS2染毒组比较，细胞中cAMP 和cGMP水平均显著增高（P0.05）；睾丸支持细胞中各染毒组cAMP和cGMP 水平均无明显改变（P0.05）。结论：CS2可明显降低大鼠下丘脑神经元中cGMP水平，并能被SNP拮抗，但对垂体和睾丸cAMP和cGMP 没有影响，提示CS2可能通过NO-cGMP途径影响下丘脑分泌功能，而CS2对垂体和支持细胞分泌功能的影响则不依赖于cAMP和cGMP。关键词：二硫化碳；下丘脑－垂体－性腺轴；细胞培养技术；一氧化