dba2小鼠听觉中枢退行性变及其发病机制的探讨word格式论文.docxVIP

缩写英文缩略英文中文mtDNAmitochondrial Deoxyribonucleic acid线粒体脱氧核糖核苷酸AC IC CN ABR HEDb TEM PCR COX3Bp MDAB W PBS NFS CTD-loop ANOVAauditory cortex inferior colliculus cochlear nuclearauditory brainstem response hematoxylin and eosin stain decibeltransmission electron microscope polymerase chain reaction cytochrome coxidase 3base pair month3,3-diaminobenzidine weekphosphate buffer sodium new fusion sequence cycle threshold displacement loop analysis of variance听皮层下丘 耳蜗核听性脑干反应HE 染色 分贝 透射电镜聚合酶链反应 细胞色素 C 氧化酶 3 碱基对月3’3-二氨基联苯胺 周磷酸盐缓冲液 新的融合序列 循环阈值 置换环 方差分析中文摘要【目的】观察 DBA/2 小鼠耳蜗核、下丘和听皮层三级听觉中枢增龄性退变并探 讨其发病机制。【方法】选择 3 周龄，8 周龄，12 周龄，8 月龄 DBA/2 小鼠检测其 ABR（4KHZ， 8KHZ，16KHZ，32KHZ）阈值,了解其听力随年龄增长的变化趋势。HE 染色、甲苯 胺蓝染色、透射电镜等方法观察不同年龄 DBA/2 小鼠耳蜗核、下丘、听皮层细胞形 态、数量及细胞显微结构的变化。提取耳蜗核、下丘、听皮层组织 DNA，实时定量 PCR 技术检测线粒体 DNA3873bp 缺失突变率及 COX3 基因相对拷贝数。免疫组织化 学方法检测 COX3 在听觉中枢的定位表达。【结果】①ABR 阈值检测显示 DBA/2 小鼠的 ABR 阈值随年龄增长呈上升趋势， 3w 龄时即出现 ABR 阈值升高，其中 32kHz 处较为显著,平均听阈约 60dB；8w 龄时主 要表现为 8kHz 和 16kHz 处听阈大幅提高；8m 龄时接近全聋(各频率 ABR 平均听阈为 90dB 左右)。ABR 潜伏期检测显示 I 波、III 波、V 波潜伏期及 I-V 波间期均随年龄增 长而延长，其中 3w 龄时即出现 32kHz 波形不清，波幅小；12w 龄与 8w 龄相比较， 4kHz 及 8kHz 各潜伏期变化不显著(P0.05)；8m 龄时各频率 I、III、V 波均无法引出。②光镜观察发现，随年龄增长，DBA/2 小鼠耳蜗核、下丘和听皮层神经元数量减少， 体积变小，神经胶质细胞增多，尼氏小体溶解。8m 龄时耳蜗核、下丘和听皮层组织 明显疏松，细胞排列紊乱，神经元细胞扭曲变形，胞质胞核分界不清。③电镜观察发 现，随年龄增长，DBA/2 小鼠耳蜗核、下丘和听皮层神经元细胞逐渐出现细胞核透亮 度降低、固缩、核膜不完整、核周间隙增宽，线粒体出现水肿、结构模糊，内质网扩 张，脂褐素大量增多，有髓神经纤维出现脱髓鞘变性。 ④耳蜗核、下丘和听皮 层 mtDNA3873bp 大片段缺失率为 10-4～10-5，各年龄组之间差异无统计学意义（P0.05）。 各年龄组耳蜗核、下丘和听皮层 COX3 基因缺失率无明显差异（P0.05）。⑤免疫组 化结果表明，耳蜗核、下丘和听皮层 COX3 表达未发生明显增龄性变化。【结论】①国产 DBA/2 小鼠耳蜗核、下丘和听皮层的早老性改变可作为老年性聋研究小鼠模型。②DBA/2 小鼠听觉早衰与 mtDNA3873bp 缺失、COX3 基因缺失无显著线性关系。【关键词】 DBA/2 小鼠；老化；听觉中枢；线粒体；细胞色素 C 氧化酶 3ABSTRACTObjective:To investigate age-related morphology changes and the pathogenesis in auditory cortex(AC),inferior colliculus(IC) and cochlear nuclear(CN) of DBA/2 mice.Methods:DBA/2 mice were divided into four groups as age, including 3weeks group, 8weeks group, 12weeks group and 8months group. The hearing threshold was tested by auditory brainstem response(