dehp及des对大鼠睾酮合成关键酶基因表达影响和隐睾机制的分析word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 目 录 中文摘要 7 英文摘要 10 符号说明 13 第一部分 环境内分泌干扰物 DEHP 及 DES 对子代 SD 大鼠睾丸下降 和睾丸组织形态学的影响 前言 14 1.实验材料 16 2.实验方法 16 3.实验结果 19 4.讨论 21 5.结论 23 6.参考文献 24 第二部分 环境内分泌干扰物 DEHP 及 DES 对子代 SD 大鼠睾酮合成 关键酶 P450scc,Star,3β-HSD mRNA 表达的影响 前言 26 1.实验材料 28 2.实验方法 29 3.实验结果 31 4.讨论 35 5.结论 36 6.参考文献 38 5  7.论著 39 8.综述 49 9.致谢 55 10.攻读学位期间发表的论文目录 56 6  DEHP 及 DES 对大鼠睾酮合成关键酶基因表达影响和隐睾机 制的研究 摘 要 目的 通过用邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 (DEHP)及乙烯雌酚 （DES）染毒孕期（GND12-PND3）SD 大鼠，统计子代雄鼠隐睾率，测 血清睾酮量，测睾酮合成通路中关键酶：细胞色素 P450 胆固醇侧链 裂解酶(P450scc)mRNA，急性调节蛋白酶(Star)mRNA 和 3β 类固醇脱 氢酶(3β- HSD)mRNA 的相对表达量，从而初步探究环境内分泌干扰 物致子代大鼠隐睾的机理。 方法 购买的 SPF 大鼠在屏蔽环境动物实验室内适应性饲养 1 周 后，雌雄大鼠按 2:1 的比例合笼，次日 8 点将雌鼠逐一阴道涂片后显 微镜下观察，发现精子当日记为孕期零天（GND0）。将怀孕母鼠取出 放单独一笼，随机分为空白对照组,玉米油组，DEHP 低剂量组，DEHP 中剂量组，DEHP 高剂量组,DES 组 6 个组别，每组 8 只。玉米油组: 喂饲 1ml 玉米油/d，DEHP 低剂量组：喂饲 DEHP100mg /kg/d＋1ml 玉 米油/d，DEHP 中剂量组：喂饲 DEHP500mg/kg/d＋1ml 玉米油/d，DEHP 高剂量组: 喂饲 DEHP750mg/kg/d＋1ml 玉米油/d，DES 组：喂饲 DES100mg/kg/d＋1ml 玉米油/d。正常对照组：常规喂饲饲料，不给 于其他处理。在雌鼠孕 12 天开始按照上述剂量给予孕鼠灌药至仔鼠 生后 3 天。待 F1 代鼠生后 30 天时，处死子代雄鼠。统计各组子代雄 7  鼠数量及隐睾仔鼠数目，显微镜下观察睾丸组织学变化，Real-time PCR 检测雄激素关键酶 P450scc 酶, Star 酶和 3β- HSD 酶的 mRNA 相 对表达量。 结果 孕期母鼠在窗口期（GND12-PND3）暴露于 DEHP 低，中、高 剂量和 DES 都可引起生后 30 天部分 SD 大鼠隐睾。且随着 DEHP 剂量 的升高呈现隐睾发生率增加，低剂量组的隐睾率（22.6%）、中剂量组 隐睾率（38.6%）、高剂量组隐睾率（46.1%）、DES 组隐睾率（43.3%） 与正常组相比都有统计学意义（P＜0.05）。DEHP 低、中、高剂量组 及 DES 组染毒孕鼠后其仔鼠血清睾酮的浓度都出现减少趋势，并且呈 现剂量依赖性。DEHP 中、高剂量组和 DES 组与正常对照组比较，睾 酮浓度明显降低，差异有统计学意义﹙P＜0.05﹚，但低剂量组其睾 酮浓度与正常对照组及玉米油组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 正常对照组和玉米油组睾丸组织学显示：生精细胞规整，生精小管之 间无 Leydig 细胞聚集。DEHP 低剂量组睾丸组织学无特异变化。但 DEHP 中、高剂量组可见 Leydig 细胞(间质细胞)增生，且聚集成团。DES 组未见明显 Leydig 细胞聚集，但有生精细胞减少，松散稀疏。DEHP 低、中、高剂量组 P450scc，3β-HSD 的 mRNA 的表达都减少。DEHP 高剂量组 P450scc 和 3β-HSD 与对照组比较差异有统计学意义（P＜ 0.05）。DEHP 各剂量组 Star 酶的 mRNA 的表达量增多且都具有统计学 意义。DES 组三种酶的表达量都减少，但其中 Star 酶的 mRNA 的表达 量与对照组比较差异无统计学差异。 结论 1.胚胎性发育关键期一定剂量 DEHP 和 DES 的暴露都会导致 8  SD 大鼠隐睾。2.DEHP 中、高剂量组和 DES 组 SD 大鼠 Leydig 细胞都 有不同程度的聚集。3.DEHP 中高剂量组和 DES 组血液睾酮水平（T） 均减少且和对照组比较均有统计学差异。（P＜0.05）。4.DEHP 和 DES 都会影响 SD 大鼠的雄激素形成通路中的关键酶 P450scc，3β-HSD 和 Star 基因表达，DEHP 及