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DLL4/Notch1信号通路对白血病细胞系K562细胞生长的影响摘要目的:本研究将Notch的配体DLL4基因转染慢性髓细胞白血病细胞系K562细胞，旨在探讨外源性DLL4基因是否活化K562细胞内Notch1信号通路，及对细胞增殖和凋亡的影响。方法：试验分组：①正常对照组（未转染组）；②阴性对照组（转染质粒pBudCE4.1 组）；③实验组（转染质粒pBudCE4.1-DLL4组）。采用脂质体Lipofectinamine2000 介导将各组质粒分别转染K562细胞：①分别用RT-PCR和Westernblot检测转染质粒48小时后各组细胞DLL4的mRNA及蛋白表达，同时用细胞免疫荧光化学法进一步证明DLL4蛋白是否在转染细胞的细胞膜和细胞浆内高表达；②分别用RT-PCR和Westernblot检测转染质粒48小时后各组细胞Notch1受体胞内区(NICD)、下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表达；③用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况，用流式细胞仪检测转染质粒48小时后各组细胞的凋亡情况。结果：用脂质体2000介导各组质粒转染K562细胞：①RT-PCR和Westernblot结果示转染质粒48小时后实验组DLL4的mRNA及蛋白表达量比两个对照组明显增多（P0.05，有统计学意义），细胞免疫荧光化学法进一步证明DLL4蛋白主要在转染细胞的细胞膜和细胞浆内高表达，证明质粒成功转染K562细胞；②RT-PCR和Westernblot结果示转染质粒48小时后实验组Notch1受体胞内区(NICD)、下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表达量比两个对照组明显增多（P0.05，有统计学意义），证明外源性DLL4基因可有效活化K562细胞内Notch1信号通路；③CCK8结果示实验组细胞的生长速度明显受到抑制，实验组细胞凋亡率明显高于两个对照组（P0.05,有统计学意义）。结论：外源性DLL4基因成功转染慢性髓细胞白血病细胞系K562细胞后，可通过活化K562细胞内Notch1信号通路，抑制细胞生长及诱导细胞凋亡。关键词：DLL4,Notch1,K562,基因转染Effect oftheDLL4/Notch1signalingpathwayon growthoftheleukemia cell lineK562cellsAbstractObjective:ToinvestigateeffectsoftheNotch1expressiononcell proliferationandapoptosiswhentheDLL4wasover-expressedinhuman chronic myeloid leukemia cell line K562 cells.Methods:Thecellsaredividedintothreegroups：normalcontrolgroup (un-transfectedgroup),negativecontrolgroup(BudCE4.1transfected group)andexperimentalgroup(pBudCE4.1-DLL4transfectedgroup).48hours aftertransfectedintoK562cellsbylipofectamine2000witheachgroup ofplasmid,RT-PCRandWesternblotwereappliedtomonitorthemRNAand proteinexpressionofexogenousDLL4.Meanwhile,immunofluorescence stainingforfluorescencemicroscopydemonstratedthatDLL4proteincould bedetectedincellmembraneandcytoplasmoftransfected cells,indicatingsuccessfulexpressionofDLL4inK562cells.48hours aftertransfection,RT-PCRandWesternblotwerealsoappliedtomonitor themRNAandproteinexpressionofNICDandtargetgeneHes1,indicating theactivationoftheNotch1signalingpathwayinK562cellstransfected withexogenousDLL4gene.CellCountingKit-8wasusedtodetectthe proliferationofK562cellsandflowcytometrywasusedtodet