elmlpa技术的建立及mlpadhplc在染色体非整倍体诊断中的应用研究word格式论文.docxVIP

elmlpa技术的建立及mlpadhplc在染色体非整倍体诊断中的应用研究word格式论文.docx

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elmlpa技术的建立及mlpadhplc在染色体非整倍体诊断中的应用研究word格式论文

学位论文独创性声明本人声明,所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明,愿意承担以下责任和后果:1、交回学校授予的学位证书;2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报;3、本文按照学校规定的方式,对因不当取得学位给学校造成的名誉损害,进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名:日期:年月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名:日期:年月日指导教师签名:日期:年月日(本声明的版权归山西医科大学所有,未经许可,任何单位及任何个人不得擅自使用)第一部分、EL-MLPA技术的建立摘要目的:①研究建立一种检测21号染色体上21-三体综合征(D.S)关键区的短串联重复序列(STR)等位基因拷贝数的方法。②探索21-三体综合征无创产前筛查的可行性。方法:① 以多重连接探针扩增技术(MLPA)为基础,在21 号染色体上选择8 个在中国人群中杂合度高的STR 序列,合成延伸-依赖于多重连接探针扩增技术(EL-MLPA)所用的8对探针。②在同一反应管内同时进行左探针的延伸及其与右探针的连接,即:选出最适宜的DNA 聚合酶(AmpliTaq DNA Polymerase,stoffel Fragment)与连接酶(Ampligase,SALSA Ligase-65),并将其联合用于同时进行延伸和连接反应,建立EL-MLPA技术。③人外周血中DNA的提取:本实验采用Qiagene公司的QIAampDNABloodMiniKits 试剂盒提取DNA,用DHPLC(变性液相高效色谱)仪检测其纯度,并用细胞遗传学染色体核型分析证实其核型。④ 用EL-MLPA 技术对所提取DNA 标本中21 号染色体上8个STR多态性等位基因进行定量检测。⑤经ABI3130XL分离、分析,并和染色体核型分析结果进行对比,验证该技术的可行性及稳定性。结果:用该EL-MLPA 技术检测了80 例外周血DNA,其中包括50 份正常DNA、30 份21-三体DNA 标本。经ABI 3130XL 分离、分析,结果显示:检测正常人DNA 所得图谱中,出现1 个峰,峰高耸,或出现2 个峰,峰高接近;检测21-三体DNA 所得图谱中,出现2个峰,其中一个峰高约是另一个峰高的2倍,或出现3个峰,峰高接近。检测结果与染色体核型分析结果一致。结论:① EL-MLPA 技术是检测21 号染色体上STR 等位基因拷贝数的较好方法。②所建立的EL-MLPA 能准确测出靶基因上STR 等位基因片段拷贝数0.5-1.0 倍的增加或减少,可用于21-三体综合征胎儿的产前筛查。关键词:延伸-依赖于多重连接探针扩增技术(EL-MLPA);短串联重复序列(STR);21-三体综合征(D.S);TheEstablishmentofEL–MLPAtechnologyAbstractObjective:①Studyingandestablishingamethodcandetecttrisomy21syndrome(D.S)criticalregionofshorttandemrepeat(STR)allelecopynumberon21chromosome.②Discoverytrisomy21syndromefeasibilityofnoninvasiveprenatalscreening.Methods: ① Based on the MLPAtechnology, we select 8 high heterozygosity of STRsequencewhichhashighheterozygosityon21chromosomeinChinesepeopleandsynthetic8probeswhichneedtobeusedbyEL-MLPA.② Inthesamereactiontube,leftprobeisextensiveandconnectwithrightprobesimultaneous

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