erk12对高糖环境下足细胞凋亡的作用及来氟米特对其的影响word格式论文.docx

摘要目的观察ERK1/2对高糖环境下足细胞凋亡的作用及来氟米特对其的影响，以进一步探讨来氟米特对DN治疗作用及其可能机制。方法培养的人足细胞分为正常糖组、高渗对照组、高糖组，高糖组按不同刺激时间又分为0.5h、1h、6h、12h、24h五组，应用Western印迹分析法检测各组足细胞ERK1/2 信号途径中ERK1/2蛋白活化的变化。足细胞凋亡检测：将足细胞分为高糖对照组、高糖+ 抑制剂组、高糖+抑制剂+来氟米特（A771726）组、高糖+A771726组，将以上各组足细胞培养24小时后，分别进行ERK1/2信号途径的检测同前及流式细胞仪检测足细胞的凋亡率。结果（1）高糖组30分钟可以活化ERK1/2蛋白，6h开始达高峰，持续活化到24小时开始降至基础水平。正常糖及高渗对照组未能活化ERK1/2。（2）与高糖组相比，ERK1/2蛋白抑制剂（PD98059）抑制了ERK1/2的磷酸化，使磷酸化的ERK1/2（P-ERK1/2）蛋白表达明显减少（P=0.003），从而影响了下游多种核转录因子的活化,影响目的基因的表达而增加了足细胞的凋亡（P=0.001）。（3）A771726 可以增加P-ERK1/2 的表达量（P=0.002），从而减少足细胞的凋亡（P=0.021）。而PD98059可以影响A771726的作用，使其对足细胞的保护作用减弱，其凋亡率比高糖组明显增加（P=0.006）。结论ERK1/2信号途径参与了来氟米特对足细胞的保护作用。关键词糖尿病肾病；ERK1/2；来氟米特；A771726；足细胞ABSTRACTObjectiveToinvestigatetheeffectsofERK1/2andleflunomideinterventioninpodocyte inducedbyhighglucoseand relevantmechanisms.Methodshumanpodocytesculturedinvitroweredividedintonormalglucosegroup,high permeabilitygroup,highglucosegroupwhichwasdetectedat0.5h、1h、6h、12h、24hafterinduced.ChangesofERK1/2signalpathwayineachgroupweredetectedbyusingWestern blotting.Detectionofpodocyteapoptosis:minutes,reachedthepeakathour6;maintainedthe activationtohour24,andthandeclinedtothebasallevel.However,activationofERK1/2was notdetectedinnormalglucoseand highpodocytesweredivided into highglucosecontrolgroup、inhibitorgroup,inhibitor+A771726group,andA771726group.ChangesofERK1/2signalpathwayandpodocyteapoptosisineachgroupweredetectedbyusingWesternblotting andflow cytometryrespectivelyafterculturedfor 24 hours.ResultsHighglucose medium inducedphosphorylationofERK1/2 asearlyas30 permeability groups.Comparedwithhighglucosegroup,phosphorylationofERK1/2wasblockedbyPD98059,a specificERK1/2activationinhibitior,whichattenuatedthehighglucose-inducedexpressionofP-ERK1/2 obviously（P=0.003）and result to more podocyte apoptosis by influencing theactivation of manydownstreamnuclear transcription factors and expressionoftarget gene（P=0.001）.A771726reducedpodocyteapoptosis（P=0.021）byincreasingexpressionof P-ERK1/2（P=0.002）.However,PD98059 influencd