eml4alk基因融合位点的结构分析和tnfα基因308位点单核苷酸多态性与肺癌相关性进行研究word格式论文.docx

学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。，保密在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年 月 日 导师签名 ：日期：年 月 日中文摘要研究目的：目前肺癌是人类常见的恶性肿瘤之一，在中国因肺癌死亡人数已 经居于癌症死亡率首位。非小细胞肺癌( non-small cell lung cancer，NSCLC) 约 占所有肺癌的80%~85%，其中约25%~30% 就诊时已是疾病晚期，约40%~50% 已有远处转移，因而失去最佳手术切除机会，全身化疗及放疗是其主要的治疗 手段。目前，以铂类为基础联合第三代抗肿瘤药物( 吉西他滨、长春瑞滨、紫杉 类药物等) 的化疗方案是晚期NSCLC的标准治疗方案，但化疗有效率也仅为 30%~40%，并且很多患者出现呕吐，脱发等严重副反应，难以耐受。近年针对 EGFR和K-ras等突变靶点研究一直火热，并涌现出许多针对EGFR靶点的药物， 疗效显著。2007年日本学者Soda等首次发现EML4-ALK(棘皮动物微管相关蛋白 样4-间变性淋巴瘤激酶)融合基因，研究发现其与EGFR和K-ras 的突变可能存在 不共存现象,提示该基因可能是非小细胞肺癌特异性较高的又一分子靶点。目前 针对EML4-ALK基因的融合位点结构研究较少，而其融合机制仍不清楚。本课 题的研究目的在于通过对H2228细胞株中EML4-ALK融合基因的融合位点的结 构分析，初步探讨EML4-ALK基因的融合方式和可能的融合机制。同时，我们 亦通过对正常人群和原发性肺癌患者人群中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因-308 位点单核苷酸多态性的检查，初步对TNF-α基因-308位点单核苷酸的多态性与原 发性肺癌相关性进行研究。方法：本课题分为两部分：第一部分采用巢式 PCR 扩增 EML4-ALK 融合基因 并对扩增产物进行测序，然后进行序列拼接，进一步应用 NCBI-BIAST(National Center for Biotechnology Information)及 CENSOR 系统分析该基因融合位点的序 列结构和发生融合的可能机制。第二部分应用高通量 TaqMan-MGB 探针技术对 TNF-α -308G/A 位点，即 rs1800629 位点进行基因分型，分析比较 447 例健康对 照者和 250 例原发性肺癌患者的基因类型。采用 SPSS 18.0 软件对数据资料进行 统计分析。结果：1.通过对融合基因的分析，发现在断裂点附近存在三个 Alu 重复序列， 并发现 ALK 序列断裂点附近存在 MIR 序列。断裂点周围存在大量正向重复序列 CTGT,及 X 元件的互补序列 CCAGC，这些序列有可能促进 DNA 断裂和末端接 合，并激发附近 ALU 序列的重组,并发现两个 SNP 位点。2.分析结果显示 TNF-α-308 位点基因多态性在病例组和对照组中的分布频率具有统计学意义，（PI＜0.05）。其中，A/G 基因型在男性、吸烟/非吸烟、小细胞或非小细胞肺癌患者中相对于 GG 型均为危险因素。结论：1.H2228 细胞系融合基因 EML4-ALK 融合序列中存在 ALU 重复序列及 MIR 序列和大量热点序列 CTGT 和 CCAGC，均可能与其融合机制相关，有待进 一步探讨。2. TNF-α-308G/A 位点基因多态性与中国原发性肺癌发病易感性显著 相关。关键词：非小细胞肺癌EML4-ALK 融合基因ALU 重复序列单核苷酸多态 性肿瘤坏死因子-α基因IIAbstractObjective: Lung cancer is one of the most prevalence malignances, of whichnon-small cell lung cancer (NSCLC) account for 80%~85% of lung cancer. About 25%~ 30% was terminally when they see a doctor, about 40% ~ 50% for distant metas