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抗体库的应用.ppt

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抗体库的应用 提高抗体的表达量;利用大肠杆菌作为表达体系的优点;不足之处;与外源基因有效表达的相关因素; 构建表达载体PGC4C2 转化HB2151表达 纯化scFv 1分子量为30KDa 2合成水平10mg/l 3对 HBsAg亲和力高 ; 表达载体 噬菌体pHFA 大肠杆菌(mutD5-FIT和XL1-RED) 致突变(37℃10ml培养液中震荡培养8-12H达到对数生长期时 将培养液按1:100稀释,继续培养,循环5次) 5次筛选 感染大肠杆菌HB2151表达 检测亲和力 分析亲和力强的scFv的DNA序列;;突变株含有28个点突变,其中82.2%为颠换,只有17.8%的转换。 ;某些密码子变为优先密码子有些变为罕见密码子 有改变侧链的大小(脯氨酸替换亮氨酸的突变X2C4) 有些改变了荷电(天冬氨酸替换酪氨酸的突变体X2C4和X8C12;精氨酸替换异亮氨酸的突变体X8C12);X2D5 VL: 2号位 Ile His 4号位 Leu Val 72号位 Leu Ile ;;1mRNA的稳定性 2翻译的起始 3翻译的延伸 4氨基酸的错误参入 5翻译的终止

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