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抗体库的应用提高抗体的表达量;利用大肠杆菌作为表达体系的优点;不足之处;与外源基因有效表达的相关因素; 构建表达载体PGC4C2
转化HB2151表达
纯化scFv
1分子量为30KDa
2合成水平10mg/l
3对 HBsAg亲和力高
; 表达载体 噬菌体pHFA
大肠杆菌(mutD5-FIT和XL1-RED)
致突变(37℃10ml培养液中震荡培养8-12H达到对数生长期时
将培养液按1:100稀释,继续培养,循环5次)
5次筛选
感染大肠杆菌HB2151表达
检测亲和力
分析亲和力强的scFv的DNA序列;;突变株含有28个点突变,其中82.2%为颠换,只有17.8%的转换。
;某些密码子变为优先密码子有些变为罕见密码子
有改变侧链的大小(脯氨酸替换亮氨酸的突变X2C4)
有些改变了荷电(天冬氨酸替换酪氨酸的突变体X2C4和X8C12;精氨酸替换异亮氨酸的突变体X8C12);X2D5
VL: 2号位 Ile His
4号位 Leu Val
72号位 Leu Ile
;;1mRNA的稳定性
2翻译的起始
3翻译的延伸
4氨基酸的错误参入
5翻译的终止
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