生物化学和分子生物学实验1.pptVIP

生物化学和分子生物学实验 必须穿白大褂； 书包放在实验台的上层架子上； 实验报告在实验课后24小时内由课代统一上交； 值日生注意事项强调：1. 清洁实验台上层架子；2. 清洁比色皿；3. 将所有移液枪调到最大量程； 第一节 分光光度法(Spectrophotometry) 定义： 根据物质对光的吸收特性和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法。 溶液的颜色 互补色 光 可见光 光的吸收定律 摩尔吸光系数：当溶液浓度为1mol/L,光程为1cm时所测的的一定波长下的吸光度。 百分比吸光系数：当溶液浓度为1g/100ml,光程为1cm时所测的的一定波长下的吸光度 波长的选择 一般选择待测物质最大的吸收峰波长 1 应使得被测溶液有适当的光密度，一般而言，适当的光密度为0.1-0.7 2 应使干扰影响降低至最低限度 3 应使标准曲线在尽可能大的范围内接近直线。 CuSO4的含量测定 见表1-2-1 A标准=K标准L标准C标准 A测定=K测定L测定C测定 此时C标准与C测定为稀释后的浓度，而我们已知道的标准液和需要测定的均为稀释前的浓度 CS*Vs= C标准*Vs终 Cx*Vx= C测定*Vx终 实验报告 一 原始记录 记录实验所获得的原始数据。 二 实验报告 将原始记录置于第一页，装订一同上交 实验原理（清晰） 实验步骤（简略但清晰） 数据处理（数据带入的过程，若为定性实验则为观察到的现象） 实验结论 实验讨论（讨论实验成败的原因，实验可改良的地方等） * 溶液的颜色实质是它所吸收的色光的互补色。如：日光照射KMnO4，其中绿光被吸收，故溶液呈紫色。CuSO4呈蓝色是由于溶液吸收了黄光。 溶液越浓，光选择吸收越多，颜色越深。 比较溶液颜色的深浅，实质比较溶液对光的吸收程度。 /wiki/%E9%A2%9C%E8%89%B2 互补色光—— 如：黄光和蓝光； 红光和绿光。 Lambert-Beer定律 （Lambert Beer’s Law）: A=kCL 物质对光的吸收 To a specific wavelength, L 光是一种电磁波。自然光是由波长（?）不同的电磁波组成的混合光。 可见光， ?在400~760nm范围。 A = -lgT =lg A=KLC ——Lambert-Beer定律 透光率 吸光度 A=KLC mol·L-1 摩尔吸光系数 g · 100ml-1 百分比吸光系数 7.0 6.2 6.0 ddw 0.8 CuSO4测定液 1.0 CuSO4标准液 空白管 测定管 标准管 试剂 A标准 A测定 C标准 C测定 = A标准 A测定 C标准 C测定 = A标准 A测定 = CS*Vx终*Vs Cx*Vs终*Vx A标准 A测定 = CS*Vs Cx*Vx = Cx A标准 CS * Vs Vx A测定 标准 测定 空白 A 0.00 原始记录需实验课结束教师签字 *