实验二 琼脂糖凝胶电泳5.pptVIP

实验二 琼脂糖凝胶电泳 原理 DNA 分子是两性电解质， 在高于其等电点的溶液（ pH8.0~pH8.3 ）中 ，碱基几乎不解离，磷酸基团全部解离， DNA 分子带负电荷，在电场中向正极移动。 电泳时DNA 分子颗粒在电场中通过凝胶介质而泳动。颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则泳动速度慢。 DNA分子的大小 双链DNA分子在凝胶中迁移的速率与其碱基数的常用对数成反比。 分子越大，迁移越慢。一是摩擦阻力越大，二是大分子通过凝胶孔径的效率低于较小的分子。 DNA的构象 DNA的构象 不同构象DNA分子在电场中移动的距离不同。具有相同分子量的线状、开环状和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度不同。 迁移速度： 超螺旋的DNA线状DNA 开环DNA 。 琼脂糖浓度 相同大小的线状 DNA片断在不同浓度的琼脂糖凝胶中迁移率不同. 琼脂糖浓度(%)　　　分离范围（kb） 0.3 　　 5-60 0.6 　 1-20 0.7 　　 0.8-10 0.9