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内容提要 生物芯片的定义与分类 生物芯片诞生的基础 微阵列芯片实验流程图 微阵列芯片种类 微阵列芯片制备 电化学检测方法 生物芯片应用 近期发展趋势 信息来源 生物芯片的定义与分类 生物芯片的定义与分类 生物芯片的定义与分类 微阵列芯片 微阵列芯片是由生物材料(核酸、蛋白质、细胞或组织)按矩阵方式排列于固相基质表面构成的分析器件。 微流体芯片 主动式芯片 芯片实验室 (Lab-on-Chip) 生物芯片诞生的基础 – 微加工 生物芯片诞生的基础 – 核酸合成 生物芯片诞生的基础 - PCR 生物芯片诞生的基础 - 核酸杂交 DNA微阵列芯片实验的相关仪器 PCR仪 点样仪 杂交仪 扫描仪 微阵列芯片种类 常见微阵列芯片制备方法 直接点样制备 DNA 点阵 点样样品(预先制备) 寡核苷酸 cDNA 基底材料 硅片 玻片 塑料板 玻片表面修饰 硅烷化 （共价键合） 聚赖氨酸（静电吸附） 玻片表面修饰 玻片硅烷化 生物分子表面固定 生物分子表面固定 生物芯片检测方法-荧光 生物芯片检测方法-电化学 电化学生物传感器 电化学生物传感器 电化学生物传感器 蛋白质和酶的电化学研究 蛋白质和酶的电化学研究 酶的电化学研究 蛋白质相互作用的电化学研究 蛋白质相互作用的电化学研究 核酸芯片电化学检测 核酸芯片电化学检测 生物芯片检测方法研究 生物芯片检测方法 – 电化学 DNA微阵列芯片用于药物研发 新药开发 DNA微阵列芯片技术具有高通量、大规模、平行性等特点可以进行新药的筛选 高通量的DNA微阵列芯片技术可发现众多的新基因和新的靶分子用于新药的设计　 研究药物作用机理 药物毒性预测 慢性毒性和副作用，往往涉及基因或基因表达的改变 用芯片作大规模的表达研究可省略大量的动物试验 国内外生物芯片的发展现状 目前美国有2000多家公司参与研制生物芯片，其中开发DNA芯片技术为主的公司有十几家。 国际上每年在生物芯片投资总额达7―10亿美元 。 预计在今后五年内生物芯片销售可达200-300亿美元 。 国内从事DNA芯片研究与开发的机构主要有清华大学、北京大学、浙江大学及北京、上海、西安芯片研究中中心。 我国的生物芯片研究虽刚起步，但国家对生物芯片给予了高度重视。 生物芯片近期发展趋势 生物芯片近期发展趋势 生物芯片近期发展趋势 谢谢! 生物传感器 信号转换器 : 电化学、荧光 表面化学: 吸附、分子自主装、LB膜 生物识别分子: 酶、抗原/抗体、核酸 信号处理器 样品: 利用酶反应的专一性、高效催化性能 酶活性抑制：有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正 常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相 关性。通过抑制率可以判断出样品中是否有有机磷 或氨基甲酸酯类农药的存在 酶电极 利用抗原／抗体反应的特异 性、普遍性和电化学标记物 检测有机小分子、生物大分子 典型例子：碱性磷酸酶或辣根过氧化酶标记 免疫电化学 利用核酸杂交反应的特异性和电化学标记物 检测细菌、病毒 基因芯片检测 核酸电化学 酶电极 NADH NADH Dehydrogenase CoQ FADH2 Cytochrome bc1 Complex Cytochrome c Cytochrome Oxidase O2 了解生物体系电子转移机理 难点： 氧化还原位点包藏在蛋白质内 部，与电极距离太大； 蛋白质与电极定向随意，少数有利定向发生概率低； 蛋白质容易吸附上电极表面，导致活性消失 解决办法： 电极表面修饰 循环伏安图 p-Cresol Methylhydoxylase MW 115 KD 酶的电催化效应 底物的浓度曲线 Cyt c (WT) Cyt b5 (WT) Both Cyt c Asn52Ile Cyt c Lys72Asp 生物分子定向固定 分子自组装 蛋白质重组装 原理 电极芯片 Motorola’s e-Sensor Xanthon’s 96-well plate Ru(bpy)3 (II) ------ Ru(bpy)3 (III) + e Ru(bpy)3 (III) + DNA ------ Ru(bpy)3(II) + DNA (ox) 常规电化学 无信号放大机制 可检测1-2个电子/标记物 新型电化学 有信号放大机制 可检测多个电子/标记物 信号放大电化学检测法 新型信号放大体系 标记物: Ru(bpy)3 放大剂: 草酸钠 电极: 氧化铟锡 通过 Avidin-Biotin 特异反应检测 Biotin 应用：小分子检测 应用：小分子检测 Ru(bpy)3-labeled Biotin 应用：小分子检测 Pro