MG第二章 基因突变 节 微生物遗传 技术方案.pptVIP

第 二 章 第 5 节、致癌物质的检测 第 6 节、 诱变育种与突变 型的筛选 第五节 致癌物质的检测 1. 灵敏度 能将少数突变型选择出来，将多数未突变类型 淘汰掉。 回复突变比正向突变更容易选择： CM MM 正向突变 X+ X — ＋ — 筛选困难 回复突变 X— X + ＋ ＋ 筛选容易 2.代表性 对于一种生物具有诱变作用的药物，对其它生物是否同样有诱变作用？ 对某一基因有较强诱变作用的药物，对其它基因是否也有同样的作用 3.方法要简便 爱姆斯测验（Ames Test） 1972年由Bruce Ames 建立，使用一套突变型的 沙门氏菌： TA1535 rfa Δuvr B his G 46 碱基置换 TA1536 rfa Δuvr B his C 207 移码突变GC缺失 TA1537 rfa Δuvr B his C 3076 移码突变GC增加 TA1538 rfa Δuvr B his D 3052 移码GC/CG双缺 理论依据： 认为细胞癌变是某些体细胞基因发生突变的结果。 菌株的特点： 1. 均为组氨酸缺陷型，但突变类型不同，不但可以证明诱变作用，还可以检测诱变机制。 2. 除组氨酸缺陷型外，又引入2个突变基因： rfa: 深度粗糙突变型，加强细胞表面透性，使诱变效果提高几十倍。 Δuvr B：丧失切除修复功能，使诱变效果提高十倍。 第六节 诱变育种与突变型的筛选 一、诱变育种 目的 对被处理菌体的要求（分散、单核、对数期） 诱变剂及其剂量的选择 二、突变型的筛选 高产菌株的筛选 营养缺陷型的筛选 其它突变型的筛选 一、诱变育种 诱变剂及其剂量的选择 诱变剂 亚硝基胍（NTG）： 超诱变剂，不能接触皮肤 甲基磺酸乙脂（EMS）： 诱变效率高，毒性小 紫外线（UV） ： 诱变谱广，损害眼角膜 染色体组饱和：长期使用同一种诱变剂致使诱变效果低的现象。 剂 量 每一种诱变剂对于每种生物有着特定的最适剂量。 可以用一个便于测定的突变来测定最适剂量。 剂量的选择与诱变目的有关，若是质量性状，由单基因控制，可采用高剂量；若是数量性状，由多基因控制，不能采取过高的剂量。 确定最适剂量的曲线： 诱变产量性状时诱变剂及剂量的特点 诱变剂的作用不是提高绝对产量，而是增加 变异幅度。 最适剂量处理，变异幅度最大。 高剂量处理，首先消失高产菌株。 产量性状频率分布曲线： 二、突变型的筛选 （一）高产菌株的筛选 1. 此类突变的特点： 渐进式，引起表型变异的基因数量多。 高产、低产菌株与出发菌株在形态上无明显的区别。 易受环境条件的影响，高产菌株在一定条件下才表现。 2. 如何提高初筛效率？ 对产酸菌，初筛时加酸碱指示剂 对水解酶类产生菌，加底物观察水解透明圈 对抗生素产生菌，用敏感细菌观察抑菌圈 3. 筛选多少单菌株？ 取决于突变频率 （二）营养缺陷型的筛选 所用培养基： 1 完全培养基 CM (＋) 能满足任何缺陷型的需要，由有机成分组成。 2 基本培养基 MM (－) 能满足野生型需要，由无机成分组成。 3 限制培养基 LM (＋) 在基本培养基中加入完全培养基成分。 4 补充培养基 （met）（his） 在基本培养基中加入某一类营养物质，满足某一种营 养缺陷型的要求，如补加蛋氨酸或组氨酸。 1．营养缺陷型的浓缩 青霉素浓缩法原理： 青霉素只能杀死生长繁殖的细菌，不能杀死停止分裂的细菌。在MM中，只有野生型能生长，则被杀死，而营养缺陷型由于不能生长而被保护下来，得以浓缩。 青霉素浓缩法过程： 菌种 1 诱变剂处理 置完全培养基 2 培养4～6h,离心 无氮基本培养基 3 氮饥饿4～6h, 离心