吉非替尼联合替莫唑胺对人胶质瘤细胞体外抑制作用的分析-inhibitory effect of gefitinib combined with temozolomide on human glioma cells in vitro.docxVIP

摘要研究背景:原发性颅内肿瘤的年发病率为 10/10 万人左右，颅内肿瘤约占身体各部 位肿瘤的 1.8%，在全身恶性肿瘤引起死亡占 2.35%，占第十位，而原发颅内肿瘤中以胶 质瘤为最多，在国内占 35.26%?60.96(平均 44.69%)。针对胶质瘤的治疗主要是手术为 主、放化疗相结合的综合治疗，但即使采用显微神经外科技术，也无法完全切除肿瘤， 因而胶质瘤常术后复发，胶质瘤的治疗效果并不令人满意。高级别恶性胶质瘤确诊后经 过手术切除、放疗、化疗等积极治疗，中位生存期仅为 9?12 个月。化疗是胶质瘤术后 重要的辅助治疗手段，在胶质瘤的治疗过程中有着不可替代的作用。传统的化疗主要是 应用各类细胞毒制剂，高脂溶性、分子量小、非离子化、作用时间短、能通过血脑屏障 且对正常脑组织毒性小的药物适用于颅内肿瘤的治疗。目前多数观点认为联合化疗疗效 好于单药治疗。替莫哇肢(Temozolomide，TMZ)是第二代炕化剂，易透过血脑屏障， 耐受性好，且与其他药物没有叠加毒性，部分改善了目前胶质瘤化疗有效率低的情况， 是恶性胶质瘤化疗的常用药物。胶质瘤的靶向治疗是近年来胶质瘤治疗研究的新方向。 古非替尼(Gefitinib ，ZD1839)是一种 EGFR(表皮生长因子受体)酷氨酸激酶抑制剂， 它通过抑制肿瘤细胞中 EGFR 所启动的信号通路发挥抗肿瘤效应。靶向治疗的毒副反应 轻微，因此古非替尼可能是治疗胶质瘤的理想药物，对于其是否能增强传统化疗药物敏 感性，联合应用是否优于单独应用等问题尚有待进一步证实。研究目的:对人胶质瘤细胞系 U251(WHON级)和 SHG- 44(WHOII级)进行培养，了 解其 EGFR 基因的表达。选择胶质瘤化疗药物替莫哇肢(Temozolomide，TMZ)以及 EGFR 受体抑制剂分子靶向药物古非替尼(Gefitinib，ZD1839)，进行体外药物敏感性试 验，观察替莫哇肢和古非替尼对人脑胶质瘤细胞的抑制作用及与 EGFR 表达量的关系， 评价两者的联合效应，初步预测联合应用替莫哇肢和 EGFR 靶向药物对不同级别胶质瘤 的疗效差异，以探索一种新型的个体化化疗方案，为指导临床联合应用化学药物治疗胶 质瘤提供理论依据。材 料 与 方 法 : 采 用 两 种 不 同 恶 性 程 度 的 胶 质 瘤 细 胞 系 U251(WHO N 级 ) 和SHG-44(WHOII级)进行体外细胞培养，了解其细胞中 EGFR 基因的表达。应用 MTT(四 甲基偶氮哇盐)比色法检测细胞株对肿瘤化疗药物 TMZ、ZD1839、TMZ+ZD1839 的药 物敏感性，计算抑制率( R)，应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率变化。比较 单用化疗药物和联合应用化疗药物体外抗肿瘤效果的差异。进行相关数据分析，统计学 数据整理。结果:不同胶质瘤细胞系 EGFR 的表达量不尽相同，U251 细胞系表达较高，SHG- 44 细胞系表达较低。古非替尼联合替莫哇肢对胶质瘤细胞株 U251 抑制作用明显优于单一 药物使用(P0.05)，肿瘤细胞抑制率明显高于单一药物应用，药物处理组的细胞凋 亡比例明显增高，凋亡率随用药浓度的增高而增高。结论:替莫哇肢联合分子靶向药物古非替尼对胶质瘤细胞抑制作用优于单药应用， 对于EGFR表达率高的胶质瘤联合用药后肿瘤受到明显抑制，将其应用于临床治疗人脑 胶质瘤的化学治疗值得进一步研究。体外药敏试验可以增加临床上化疗的目的性，对指 导不同级别胶质瘤的化学治疗，制定个体化化疗方案具有重要价值。关键词 胶质瘤 替莫哇肢 古非替尼 联合用药AbstractBackground: The annual incidence of primary brain tumors was 10110 million people， intracranial tumors occupy about1.8% of the tumor in the body ， accounted for 2.35% of death caused by malignant tumors， in the tenth place.While about 60% of primary intracranial tumors are glial cell tumors. The main treatment of glioma is surgery， combined with comprehensive treatment of radiotherapy and chemotherapy. But even with microsurgical surgery could not fully remove the tumor， so