细胞凋亡的结构生物学研究.ppt

细胞凋亡的结构生物学研究;结构生物学; 结构生物学能在原子水平的分辨率上研究蛋白质的结构和相互作用的方式，对于定量的、精确的研究生命过程中蛋白质发挥功能的方式有独特的优势。 在细胞凋亡机制的研究中，结构生物学也被广泛的应用，并取得了许多重要的进展。;细胞凋亡;凋亡时细胞的形态学改变;DNA ladder;细胞凋亡的生化改变;细胞凋亡与细胞坏死;1 细胞凋亡调控机制 1.1 线虫细胞凋亡的调控 4个基因严格调控线虫的细胞编码死亡：egl-1、ced-9、ced-4和ced-3。 ced-3编码一个半胱氨酸蛋白酶CED-3，其特异针对天冬氨酸残基，称Caspase。 Apoptosis ;1.2 哺乳动物细胞凋亡机制;1.2 哺乳动物细胞凋亡机制;BCL蛋白家族;内源性凋亡途径;; 内源性凋亡途径中，凋亡抑制蛋白（IAPs）调控着这一途径。 IAPs结合活化的Caspase9/3/7，并阻止其酶活性的发挥。 IAPs的抑制作用可通过存在于线粒体中的Smac(the second? mitochondria-derived activator of caspase) （又名Diablo）蛋白解除。 凋亡信号促进线粒体释放Smac来解除IAPs的抑制作用，从而使凋亡全酶发挥作用。;;人类基因组中存在至少8个凋亡抑制蛋白（IAPs）：包括XIAP、cIAP-1、cIAP-2、Survivin等。 在癌症中这些基因的功能都受到影响，因此，这些蛋白可能作为抗癌药物的靶点。 IAPs都含有Baculovirus IAP Repeat(BIR)结构域，每个IAP通常含有1~3个BIR结构域，这些BIR结构域的功能不尽相同。;XIAP的表面结构：功能非常保守的表面凹槽;2 哺乳动物细胞凋亡的结构生物学研究 四个实例： （1） Smac蛋白是如何找到IAPs并抑制其功能？ （2） IAPs是如何结合并抑制Caspase9的活性？ （3）IAPs是如何抑制效应Caspase（如Caspase 3/7）的活性的？ （4）起始Caspase是如何被激活的？;（1） Smac蛋白是如何找到IAPs并抑制其功能的？ Smac蛋白：295AA；—55AA—NH2编码线粒体定位序列（MTS），帮助Smac定位在线粒体膜上。 线粒体接受凋亡信号后，Smac 蛋白的线粒体定位信号肽被切除，形成有活性的Smac 蛋白并进入细胞质。;成熟Smac的N端为：NH2-Ala-Val-Pro-Ile，可以结合到XIAP的BIR3结构域上的表面??槽，抑制XIAP的功能。 ;（2） IAPs是如何结合并抑制Caspase9的活性？ Caspase9为同源二聚体，每个单体由两亚基p20和 p10组成。;Caspase家族;; Caspase9的N端有与Smac类似的序列：NH2-Ala-Thr-Pro-Phe, XIAP通过BIR3结构域可与其N端结合，从而抑制Caspase9的活性。 注意： XIAP的BIR3只结合一个Caspase9单体，这种结合阻止了Caspase9 二聚化，从而抑制了Caspase9 形成有活性的形式。;IAPs与Caspase9 的结合;（3）IAPs是如何抑制效应Caspase（如Cas- pase 3/7）的活性的？ XIAP与Caspase7的复合物晶体结构显示，XIAP的一段不属于BIR结构域的片段结合在Caspase-7的活性口袋区域，占据了底物所在的位点，而这段片段又不能被aspase-7切割，这样就起到了阻止Caspase-7切割其目标底物的效果。;（4）起始Caspase是如何被激活的？ 一种主流的看法认为，起始Caspase的激活需要其二聚化，而这种二聚化则是由距离上的靠近所驱使的。 具体来说，Apaf-1组成一个七聚体，而这7个单体每个又招募一个Caspase-9分子，使得Caspase-9单体分子在空间上靠近，局部产生很高的浓度，进而形成二聚体而被激活。;3 线虫细胞凋亡的结构生物学研究 纯化EGL-1、CED-9、CED-4(即Apaf-1同源蛋白)和CED-3这四个凋亡调控蛋白在体外完成已经发现的线性调控途径反应。;凋亡调控蛋白的体外相互作用;问题：