【实验报告】实验设计-镁离子对小鼠能量代谢的影响.doc

实验设计者和执行者： 镁离子对小鼠能量代谢的影响 【实验目的】 初步检测镁离子对小鼠基础能量代谢的影响，从而推测镁离子对小鼠寿命的影响 【立题依据】 镁离子作为人体内第四大离子，跟300多种酶的活性相关，长期来一直认为镁离子的代谢紊乱会引发许多疾病如糖尿病、高血压、腹泻等。近些年来发现，镁离子能影响神经系统的可塑性，已有实验证明镁离子能抑制年龄导致的记忆力下降，也有实验表明增加镁离子的摄入能减缓老年痴呆症的病症，基于目前的发现，我们认为镁离子能增强动物的学习和记忆能力。在我们的动物喂养过程中，也发现在食物或饮用水中添加可被机体吸收的镁的化合物，能延长大鼠的寿命。一般认为，寿命的延长是由于机体代谢率的下降，已有实验证明饲养温度下降4度，动物的寿命能延长16%。因而我们推测摄入足够量的镁能延长动物的寿命的原因可能是镁离子能下调动物的代谢率。我们想通过比较喂高镁食物和正常食物的小鼠的能量代谢，来检验镁离子对动物能量代谢的影响。 基础代谢是指机体在基础状态，即在清醒而极安静的状态下，不受肌肉运动、环境温度、食物特殊动力作用及精神紧张等因素影响时的能量代谢。在基础状态下，机体代谢过程中所释放的能量几乎全部转变成热能。因此，测定整个机体在单位时间内释放的总热量，就可知道同一时间内的耗能量，即能量代谢率。测定机体在单位时间内释放的总热量的方法有直接测热法和间接测热法。一般常用间接测热法，在一般混合性食物下，机体的呼吸熵为0.82，乘以20.22（标准状态下每消耗1L氧可产生20.22KJ的热量）即可计算出该时间内被测者的总产热量。 耗氧量的测定方式分为开放式和闭合式两种，本实验拟采用闭合式法，即让受测小鼠吸入基础代谢仪中的氧气，直接从仪器上读出单位时间的耗氧量。由于机体能量消耗与体表面积成正比，通常以单位时间内（1h）每平方米体表面积的产热量表示，即基础代谢率。 在测量基础代谢率后我们会取血测量血清中镁离子的含量。以检测实验组和对照组小鼠体内镁离子的水平 【实验对象：规格、数量】 考虑到实验时间的限制，我们打算实验组和对照组各测三只小鼠，本次实验仅为预实验，如果做出的实验结果有差别，实验组比对照组能量代谢率要的的话。我们将进一步改造实验装置，或购置更精密的仪器，在我们实验室（学习与记忆研究中心 刘国松教授）内大规模开展该实验。 【仪器和药品】 昆明小鼠、食物、去离子水、含镁药品、移液器、EP管、取样用毛细玻璃管、离心机（学习与记忆研究中心提供） 500~1000ml广口瓶、橡皮塞、温度计、20ml注射器、钠石灰、水检压计、白凡士林、氧气袋、螺旋夹、弹簧夹（如有仪器生理实验室不能提供的话，我们实验室想办法来提供） 【实验方法及步骤】 实验组和对照组小鼠的预饲养 实验组和对照组小鼠各三只，实验组喂含镁药品的牛奶和特制低镁食物，对照组喂去离子水和特制低镁食物，均喂养七天。该步骤在学习与研究中心进行（在实验课开始前提前七天喂养） 小鼠能量代谢的测定 装备好实验装置。水检压计的水柱放至零刻度，水中可加入少量甲基蓝溶液，以便读数。 夹闭管夹使管道系统密闭后，用注射器推进一定量气体，使检压计一侧的液面上升。停置5~10min，如液面高度不变，表示没有漏气。 将小白鼠放入广口瓶内钠石灰上，加白凡士林密封。 将注射器内涂抹少许液体石蜡，反复抽推几次，使液体石蜡在注射器形成均匀的薄层，以防气体逸出。 打开胶管上的弹簧夹，然后旋松氧气袋的螺旋夹，缓慢地送进氧气。抽注射筒芯取氧气至略超出刻度10ml处。 旋紧氧气袋上的螺旋夹，不让氧气进入。然后推注射器筒芯到10ml处，夹闭胶管上的弹簧夹，同时记下时间和广口瓶内的温度。 向前推注射器筒约2~3ml刻度，此时见水检压计与大气压相通侧的水柱液面上升。由于小白鼠代谢消耗氧气，而它产生的CO2又被钠石灰吸收，故广口瓶内的气体逐渐减少，水柱液面因而回降。待液面降至原先水平时，再向前推注射器筒芯2~3ml刻度。如此反复直至推倒10ml刻度为止。待检压计两边的水柱液面达到同一水平时，记下时间。从夹闭胶管开始至此的时间即为消耗10ml氧所需的时间。 计算小白鼠每小时产热量以及能量代谢率（假定小白鼠的呼吸熵为0.82，即氧的热价为20.22kJ/L）。 按下公式计算：小白鼠的体表面积（m）= 0.09 × 体重(kg) 每小时产热量（kJ/h）= 每小时耗氧量（L/h）× 20.22 基础代谢率 = 每小时产热量/小白鼠的体表面积 =（每小时耗氧量×20.22）/ [（0.09×体重）] kJ/mh 小鼠血清的提取和测量 用毛细玻璃管从小鼠的眼球后静脉丛取血约500ul，血样静置