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胚胎性别鉴定 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 排出的卵子在输卵管内运行。(人) 3.9 狗 12.5a 田鼠 3.8 牛 9.2a 田鼠 3.6 猪 7.5 灰鼠 3.0 兔 4.2 羊 2.9 人 4.1 马 0 火鸡 差异百分比(% ) 动物种类 差异百分比(% ) 动物种类 经流动细胞仪分析到的各种动物X和Y精子DNA含量的差异 根据哺乳动物X和Y精子DNA含量存在差异的原理,利用流动细胞检索仪进行分离X和Y精子的程序,包括将精子稀释并与荧光染料Hoechst 33342共同培养,这种染料则定量的与DNA结合。当精子通过检索仪时被定位从而被激光束激发,由于X精子比Y精子含较多的DNA,所以X精子放射出较强的荧光信号。 放射出的信号通过仪器和计算机系统扩增,分析并分辨出哪些是X精子或是Y精子,或是分辨模糊的精子。当含有精子的缓冲液离开激光系统时借助于颤动的流动室将垂直流下的液柱变成微小的液滴。与此同时,含有单个精子的液滴被充上正电荷或负电荷,并借助两块各自带正电或负电的偏斜板, 把X或Y精子分别引导到两个收集管中。 2.精子分离效率 十多年来,由于分离技术的不断改进(Rens等,1998;Welch Johnson, 1999; Johnson Welch, 1999; Johnson, 2000),故精子分离效率有了惊人的提高。 从分离速度看,与90年代初相比,目前分离速度已提高了30倍。90年代初每小时只能分离X和Y精子各36万个,而现在约各为1100万个(Johnson Welch, 1999). 从用分离纯度看, 则保持相对稳定(90%左右)。 92 85-96 90 85-95 7 牛 94 93-95 97 96-98 4 猪 92 87-95 94 88-97 8 猪 Y%(平均) Y%(范围) X%(平均) X%(范围) 分离次数 动物 用流动细胞检索仪重新分析已分离猪和牛精子的纯度 (三个试验数据) 3.精子分离后的人工授精 人们通过试验证明从分离精子所获得的怀孕率和产下数以百计的犊牛的产犊情况,初生体重以及随后的生长发育来看,和对照组所获得的不无一样,至今还没有发现任何异常现象。 因此,分离的精子应用于AI是可行的。 4.精子分离后的体外受精 英国剑桥动物生物有限公司(ABC)最早于1993年开展用分离精子进行牛IVF研究并获得成功。 他们把分离的X和Y精子分别和卵子进行IVF并将获得的预选性别胚胎移植到9头受体母牛,其中4头怀孕并分别产下3头母犊牛和3头公犊牛,其性别准确率都分别达到100%(Cran等,1993)。 随后,该公司又将分离的Y精子进行IVF并将获得的胚胎冷冻后再移植到106头受体母牛, 每头接受两枚胚胎,共产下37头公犊牛(占90%)和4头母犊牛(占10%; Cran等,1995)。 5.分离精子在人临床上的应用 在美国, 位于弗吉尼亚州的遗传与体外受精研究所(Genetic IVF Institute, Virginia) 率先进行分离人精子的研究和临床应用。其目的是防止与性别有关联的遗传疾病;二是平衡家庭中的性别比例。 目前,该研究所已将这一技术投入商业化应用之中。 6.分离精子在畜牧业上的应用 英国的Cogent公司是世界上第一家利用分离精子技术投入生产的公司。2000年7月,在英国皇家农业博览会上,Cogent正式宣布为其属下的牧场主提供奶牛分离精子的服务。目前Cogent公司拥有10台流动细胞检索仪,全日24h运转,由4名技术员操作。 目前,分离精子的销路有二,其一是销售给牧场主,由牧场主自行AI。其二是该公司为其属下农户的供体牛作超排处理后进行AI或活体采卵后IVF,将所生产的预知性别胚胎再移植到该农户的受体母牛。直至2000年7月止,该公司已在其属下的162农场进行了2000头牛的AI。 分离精子的平均怀孕率为52
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