生物化学和分子生物学实验2.pptVIP

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2018-05-20 发布于四川
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生物化学和分子生物学实验2.ppt

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第二节蛋白质定量分析蛋白质定量分析也就是蛋白质溶液的浓度测定；现实应用：1. 临床检测——血清蛋白浓度测定；2. 科学研究——纯化蛋白的浓度测定；主要方法根据蛋白质元素组成——凯氏定氮法；根据蛋白质组成特点建立的比色法——双缩脲法，lowry改良法，考马斯亮蓝染色法，BCA法；根据蛋白质的吸收特性建立的紫外分光光度法；双缩脲法蛋白质的紫外吸收四、定量分析法实验步骤如表1-2-2（p16）混匀各管，在37度水浴保温20分钟；调波长为540nm；用空白管调零；读ABS 以吸光度（A）为纵坐标，以蛋白质浓度（g/L）为横坐标做标准曲线；求待测血清样品的蛋白质浓度；取一管相近吸光度的标准管进行“标准对照法”求待测血清样品的蛋白质浓度；双缩尿法：540nm，玻璃比色杯，vis-7220 紫外法：260，280nm，石英比色杯，uv-9200或者uv-9600或者uv-2000。调节不同波长时需要再次调零。 * /wiki/456254.shtml 一、实验原理——双缩脲反应 OH- 蓝色紫红色在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比——1-10mg；蛋白质的双缩脲反应 Cu2+ OH- Tyr Trp 蛋白质分子中含有共轭双键的芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质。其最高吸收峰在280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比。由于各种蛋白质的酪氨酸和色氨酸的含量不同，因而要有待测的蛋白质的标准品作比较，才能进行准确定量。 Lambert Beer’s Law: A=kCL To a specific wavelength, （一）标准曲线法根据Lambert-Beer定律， A与C成正比配制一系列标准液 C1、C2、C3??，在?max下，测相应的A1、A2、A3……。 C / (mol· L-1) Ax Cx *