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D3S1289、D5S406、D6S277微卫星不稳定性与子宫颈癌的相关性
D3S1289、D5S406、D6S277微卫星不稳定性与子宫颈癌的相关性
【关键词】 子宫颈癌 摘 要 目的: 探讨微卫星不稳定性（microsatellite instability, MI）与子宫颈癌的相关性。方法:22例子宫颈浸润性鳞癌石蜡标本，选取3、5和6号染色体上的3个微卫星位点D3S1289、D5S406、D6S277进行MI分析。结果:在子宫颈癌标本中3个位点均未发现MI和杂合性缺失（LOH）的改变。结论:3个微卫星位点未见MI和LOH的改变，可能与病例少、位点少、种族及取样有关。
关键词 子宫颈癌；微卫星不稳定性
A Study of Microsatellite Instability in Cervical Cancer
SHI Shuxian,GENG Li
(The First Hospital of Baotou Medical College,Baotou 014010,China)
Abstract Objective:To investigate microsatellite instability (MI) in cervical cancer. Methods: MI of 3 microsatellite markers were detected in 22 invasive squamous cancers and self normal cervix.Results: MI and loss of heterozygosity（LOH） were not detected in D3S1289，D5S406，D6S2773 in 22 cervical cancers. Conclusions: The results of MI analysis were negative, may be related with less cases and microsatellite markers、races and clinician-collected cervical samples.
Key words Cervical cancer;Microsatellite instability
子宫颈癌是严重影响世界妇女健康的常见恶性肿瘤,占女性生殖道恶性肿瘤的首位。近年发病呈上升趋势并且年轻化[1]。巴氏涂片防癌普查应用久远，但影响因素较多，最终诊断需靠病理检查。微卫星不稳定性（microsatellite instability, MI）是近年来发展起来的用于检测肿瘤组织的一种新标志。研究表明MI仅存在肿瘤组织中，有可能成为检测肿瘤的早期分子标志。MI常用的分析方法是PCR-聚丙烯酰胺变性凝胶电泳及银染，应用该方法能快速有效地检测出MI和杂合性缺失（Loss of heterozygosity, LOH）。本文对子宫颈癌的微卫星不稳定性进行3个位点的研究。
1材料与方法
1.1 材料22例子宫颈浸润性鳞癌标本来自北京大学第三医院病理科1997-2002年间的存档石蜡标本，由病理科医师复核诊断。术前均未接受过放射治疗、化学治疗和激素治疗，年龄31～65岁。临床分期按FIGO分期，Ⅰ期11例，Ⅱ期8例，Ⅲ期3例。
1.2基因组DNA的提取采用显微切割法提取基因组DNA：石蜡包埋组织连续切片5μm厚，HE染色，光镜下由病理科医师标出病变部位，分别获取肿瘤组织和正常组织，二甲苯脱蜡，蛋白酶K 56℃过夜消化，酚仿抽提，紫外分光光度计定量，-20℃贮存。选用β-Actin引物（购自鼎国生物工程公司）进行PCR扩增（序列为5’GTGGGGCGCCCCAGGCACCA 3’，5’CTTCCTTAATGTCACGCACGATTTC 3’），检验基因组DNA提取的是否成功。PCR反应条件：95℃45秒，54℃30秒,72℃30秒,35个循环。PCR产物300bp，经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。
1.3微卫星不稳定性检测选用3个微卫星标记：D3S1289,3p21.2-p21.1，序列为5’AAAGCAACTTGTAAGAGAGC 3’，5’ACTCCTAGATATAATCACTGG 3’；D5S406，5p15.1-p15.2,序列为5’CCTGCCAATACTTCAAGAAA 3’，5’GGGATGCTAACTGCTGACTA 3’；D6S277，6p24-p23，序列为5’AGCTGAATAACACGCAGGTG 3’，5’ATTTTTGATGACAATGGAATGC 3’，由美国国立癌症研究所JinJen教授馈赠。PCR反应体系25μl, DNA模板1μl，上、下游引物各10pmol，10×PCR缓冲液2.5μl, 200μmol/ldNTPs 1μl，TaqDNA聚合酶1U（购自华美生物工程公
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