IFNα1b对人子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖 的影响及机制.docVIP

IFNα1b对人子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖 的影响及机制 【摘要】目的研究IFNα1b对子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖及细胞周期的影响。方法不同浓度的IFNα1b作用24h后，通过细胞计数观察对JEC的抗增殖效应，应用流式细胞技术分析细胞周期改变和细胞周期调控因子p21，cyclin A和cyclin E的表达。结果不同浓度的IFNα1b对JEC均有抗增殖作用，其中500 U/ml抗增殖作用最强。流式细胞仪（FCM）检测显示S期细胞积累，p21的表达增加和cyclin A表达减少，而cyclin E的表达增加。 结论IFNα1b能够抑制子宫内膜腺癌细胞系JEC的增殖，其机理可能与 p21的表达增加和cyclin A表达减少，导致S期细胞积累有关。 【关键词】 子宫内膜腺癌细胞系JEC IFNα1b P21 cyclin E cyclin A 1材料和方法 1.1材料 人子宫内膜腺癌细胞系JEC来源于临床诊断为子宫内膜腺癌Ⅳ期患者的腹水，由遵义医学院微生物学教研室建立培养。IFNalpha;1b为深圳科兴生物制品有限公司产品。cyclin E、cyclin A、p21试剂盒均购自天津天象人生物有限公司。PI为美国Sigma公司产品。 1.2方法 1.2.1细胞培养 JEC置入含有10%小牛血清、100U/ml青霉素、100mu;g/ml链霉素的RMPI1640培养液中，放在37℃、5%CO2的孵箱中培养。取对数生长期细胞，以1.0times;105细胞/孔加入24孔培养板或培养瓶中培养24h，换成含3%小牛血清培养液的0U/ml,100U/ml,500U/ml,2000U/ml IFNalpha;1b使用液孵育24h，进行检测。每组设3个平行孔。 1.2.2细胞计数细胞培养在24孔培养板中，经0.25%胰酶消化，冷PBS吹打成单个细胞，细胞计数板计数。 1.2.3细胞周期分析采用流式细胞仪。细胞培养在培养瓶中，经0.25%胰酶消化，冷PBS吹打成单个细胞，70%冷乙醇固定，加入50ug/ml PI染液1ml,4℃避光染色30min, 上机分析。 1.2.4cyclin E的检测细胞培养在培养瓶中，经0.25%胰酶消化，冷PBS吹打, 4%多聚甲醛固定20min，0.1% Triton X100孵育10min，加兔抗人cyclin E单克隆抗体37℃孵育2h，漂洗离心后，用山羊抗兔IgGFITC标记，4℃，1h，漂洗离心后，FCM检测。 1.2.5cyclin A和p21的检测细胞培养在培养瓶中，经0.25%胰酶消化，冷PBS吹打, 4%多聚甲醛固定20min，0.1% Triton X100孵育10min，加鼠抗人一抗37℃孵育2h，漂洗离心后，用山羊抗鼠IgGFITC标记，4℃，1h，漂洗离心后，FCM检测。 1.2.6试验结果以均数±标准差(±s）表示，SPSS11.5统计软件进行处理，显著性差异以P＜0.05为准。 2结果 2.1IFNalpha;1b对JEC增殖的影响 随浓度的增加，细胞数量明显减少，在500U/ml时抗增殖作用最强。2 000 U/ml有抗增殖作用，但抗增殖能力下降,见表1。表1 IFNalpha;1b作用24h后对JEC增殖的影响*相邻浓度比较P0.012.2细胞周期的分析 随IFNalpha;1b浓度增加，S期细胞数量相应增加，呈剂量依赖关系。0U/ml组和100U/ml组G0/G1期细胞数量没有差异(P0.05)；500U/ml组和2 000U/ml 组G0/G1期细胞数量没有差异(P0.05)；而500U/ml组G0/G1期细胞数量少于100U/ml组，差异有显著性(P0.01),见表2。 2.3p21表达 随IFNalpha;1b浓度增加，p21含量增加，在500U/ml表达最高，而在2 000U/ml表达水平降低，见表3。 2.4cyclin E表达 随IFNalpha;1b浓度增加，cyclin E含量增加，在500U/ml时表达最高，而在2 000U/ml表达水平降低，见表4。表2 不同浓度IFNalpha;1b作用24h后细胞周期各时相分布 3讨论 由于不同的IFNalpha;亚型抗癌能力有差别[2]，本研究探讨IFNalpha;1b对子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖的影响。IFNalpha;1b在一定的范围内随浓度的增加抗增殖能力增强，呈剂量依赖性关系；超过一定范围后，随浓度继续增加，抗增殖能力下降。这与前期实验中IFNalpha;抗增殖作用随浓度升高而增强的结果有区别[1]。 细胞周期是细胞增殖的基础，故我们检测IFNalpha;1b给药后细胞周期时相分布的变化。结果显示随浓度的增加，S期细胞积累，