MMP9 在卵巢子宫内膜异位症及子宫腺肌症中的表达及其意义.docVIP

MMP9 在卵巢子宫内膜异位症及子宫腺肌症中的表达及其意义 【摘要】 目的探讨MMP9在卵巢子宫内膜异位症及子宫腺肌症中的表达及临床意义。方法应用免疫组化方法对研究组39例子宫腺肌症合并卵巢子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜及异位子宫内膜及对照组27例正常子宫内膜进行MMP9检测。结果MMP9在卵巢子宫内膜异位症和腺肌症的异位内膜中表达差异无统计学意义(P＞0.05)；异位内膜与在位子宫内膜相比差异有统计学意义(P＜0.05)；异位内膜、在位内膜与正常内膜相比差异有统计学意义(P＜0.05)。结论MMP9表达增强可能与子宫内膜异位症及子宫腺肌症的发生、发展有关。 【关键词】 卵巢子宫内膜异位症　子宫腺肌症　基质金属蛋白酶 子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)与子宫腺肌症(adenomyosis，AM)的确切病因和发病机制不十分明确，近年研究发现，二者在免疫、遗传倾向方面有相似的异常改变。目前在位内膜决定论［1］的观点在EMS发病机理的研究中占主导地位。此观点认为，EMS患者与非EMS患者在位内膜之间存在差异，这种差异表现在70%～90％的妇女有经血倒流，而只有10%～15%的妇女发生EMS。EMS具有类似恶性肿瘤的周围浸润及远处转移的特点，所以近年来从恶性肿瘤发生的角度探讨EMS的发病机理成为该疾病的研究热点。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)家族能促进恶性肿瘤细胞的异位黏附、降解细胞外基质、穿透基底膜而在恶性肿瘤的转移及浸润中发挥着重要的作用。MMP9是MMPs家族中相对分子质量最大的明胶酶。本文采用免疫组化的方法，研究MMP9在卵巢子宫内膜异位症(巧囊)及AM中的表达，探讨其相关性。 1 材料与方法 1.1 组织标本来源 实验组标本来自宁夏医学院附属医院2002年1月～2006年4月间因巧囊合并AM切除子宫并行患侧卵巢切除或巧囊剥除患者39例，取巧囊和腺肌症异位内膜及在位内膜标本。年龄19～48岁(该19岁患者系先天性无阴道患者)，平均39岁。对照组为同期在我院因不孕症(排除器质性疾患及EMS)行子宫内膜活检患者的子宫内膜27例。年龄25～48岁，平均33岁。实验组与对照组患者年龄差异无统计学意义。所有患者术前均未经内分泌治疗及子宫内膜异位症药物治疗。 1.2 实验材料 鼠抗人单克隆抗体MMP9免疫组化试剂盒及DAB试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。 1.3 实验方法 标本经常规福尔马林固定，石蜡包埋，连续组织切片成4mu;ｍ厚。石蜡切片常规脱蜡至水化rarr;PBS冲洗3mintimes;3次rarr;0.3% H2O2封闭内源性过氧化物酶10minrarr;PBS冲洗3mintimes;3次rarr;滴加即用型鼠抗人MMP9单克隆抗体,室温下孵育2minrarr; PBS冲洗3mintimes;3次rarr;滴加即用型生物素标记的羊抗鼠IgG,室温下孵育20 min rarr;PBS冲洗3mintimes;3次rarr;滴加即用型链霉素生物素蛋白30 minrarr; PBS冲洗3mintimes;3次rarr;切片滴加新配置的DAB显色液，显微镜下控制显色rarr;苏木精复染核8minrarr;梯度乙醇脱水rarr;二甲苯透明rarr;中性树胶封片。 1.4 结果判定 采用双盲法，在高倍镜下观察，根据着色强度和面积进行综合评分：(1)着色强度:无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；(2)着色面积：＜5％为0分，5％～25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％为3分，＞75％为4分。以上两项结果相加，＜2分为(-)，2～3分为(＋)，4～5分为(＋＋)，6～7分为(＋＋＋)。 阳性对照片由试剂公司提供。选用PBS代替一抗作阴性对照。每次实验重复3次。 1.5 数据处理 采用SPSS 11.5统计软件进行chi;2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 MMP9蛋白的阳性表达部位主要位于腺上皮细胞的胞浆，少量表达于间质细胞浆，在高倍显微镜下呈棕黄色颗粒(见图1-4，封2)。 2.1 MMP9在异位内膜中的表达 MMP9蛋白在巧囊和AM异位内膜的表达多为中度阳性至强阳性，二者相比差异无统计学意义。MMP9蛋白在在位子宫内膜的表达多为中度阳性表达，与异位内膜相比差异有统计学意义。见表1。 表1 MMP9在异位内膜及在位内膜的表达（略） 2.2 MMP9在正常内膜中的表达 MMP9在对照组正常子宫内膜多为阴性及弱阳性表达，与异位内膜及在位内膜相比差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。 表2 MMP9在正常内膜中的表达（略） 3 讨论 3.1 MMP9与巧囊发病的关系 本实验结果显示，MMP9在异位症患者在位