第三章 菌种保藏复壮扩大培养.ppt

(一）生产用菌种的保藏及选育 第三章 第一节 菌种的保藏复壮、选育和扩大培养 3、菌种保藏的方法：斜面保藏法、矿物油保藏法、砂土保管保藏法、真空冷冻干燥法、冷冻法、液态真空干燥法、琼脂穿刺封口保藏法、曲法保藏、麦粒保藏法、无水硅胶保藏法。 （1）斜面保藏法： 在4℃左右的冰箱保藏，每隔一定时间进行移植培养后再继续保藏，如此反复。 优点：方法简单、存活率高，具有一定的保藏效果。 缺点：菌种仍有一定的强度的代谢活动条件，保存时间不长，传代多，菌种容易变异。 适用菌种：细菌、酵母、防线菌、霉菌 （2）矿物油保藏法 将生长好的斜面在无菌条件下倒入已灭菌的液体石蜡，油层高于斜面末端1cm，然后放于冰箱中保存。 适用菌种：适用于除细菌外的其它菌种 （3）砂土管保藏法 利用土壤颗粒对微生物起保护作用，提高微生物的存活率。其包括砂土制备和真空抽干两步。 适用菌种：产孢子的微生物，对于一些对干燥敏感的细菌（奈氏球菌、弧菌、假单胞杆菌）以及酵母不适用。 （4）真空冷冻干燥法 先在菌悬液加入保护剂（如：脱脂牛奶、血清等）然后在较低温度下使成冻结状态，最后减压抽干。 特点： 它是菌种保藏中最有效的一种方法。保存期可达一年至数十年之久，并且存活率高，变异率低。单使手续麻烦，需要一定的设备。 适用菌种：对于不长孢子或长的很少孢子的真菌保藏效果不佳。 （5）其他保藏方法 冷冻法：分低温冷冻（－20 ℃）与超低温冷冻（－196 ℃）两种。适用于细菌、真菌、病毒等的保藏 液态真空干燥法：菌体在恒温液态条件下进行真空干燥。适用于包括细菌、病毒，特别适用于冷冻干燥保藏效果不佳的菌种。 琼脂穿刺封口保藏法：适用于不产孢子细菌的保藏 曲法保藏：将麸皮与水按比例混合，灭菌后接入菌种，待孢子长成后即为成曲。将试管放入盛有氯化钙的干燥器中，干燥后低温保藏。适用于有大量孢子的霉菌和某些放线菌的保藏。 麦粒保藏法：麦粒灭菌后接入菌液，培养有菌丝或孢子时，置通风、避光、干燥处保藏。适用于一些放线菌、芽孢杆菌、酵母的保藏。 无水硅胶保藏法：将细胞悬浮液和等体积的脱脂灭菌牛奶混匀，加入装有无水硅胶的试管中，然后将试管放于干燥器内，室温或4 ℃保藏。对于细菌和真菌效果都较好。 国内外菌种保藏机构 菌种是一个国家的重要资源，世界各国对菌种的保藏都极为重视。世界上有700多家菌菌种保藏机构，其中国际知识产权组织承认的法定的保藏机构仅有28家。  1、我国的微生物菌种保藏机构 1）普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC） 中科院微生物所，北京， 中科院武汉病毒研究所 2）农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC） 中国农业科学院土壤肥料研究所，北京 （ISF） 3）工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） 中国食品发酵工业科学研究院，北京，（IFFI） 4）医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC） 中国医学科学院皮肤病研究所，南京 卫生部药品生物制品检定所，北京 中国医学科学院病毒研究所 5）抗生素菌种保藏管理中心（CACC） 中国医学科学学院抗生素研究所，北京 四川抗生素工业研究所，成都 华北制药厂抗生素研究所，石家庄 6）兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC） 农业部兽医药品检察所，北京 2、国外主要的微生物菌种保藏机构 1）美国标准菌种收藏所（ATCC） 2）美国冷泉港研究所（CSH） 3）日本东京大学应用微生物研究所（IAM） 4）日本东京科研化学有限公司（KCC） 5）日本大阪发酵研究所（IFO） 6）英国国立标准菌种收藏所（NCTC） 7）美国国立卫生研究所（NIH） 8）美国农业部北方开发利用研究部（NRRL） （二）菌种选育 1、选育的目的 改善菌种的特性，使产量提高，改进质量、降低成本、改革工艺、方便管理及综合利用等 2、选育的方法： A、自然选育； B、生产选育；  C、诱变育种； 1、常用的诱变剂： 2、诱变育种中需要考虑的若干因素 (1)选择合适的出发菌株 产量高、对诱变剂的敏感性大、变异幅度广 （2）复合诱变剂的使用 单一诱变剂重复使用后突变的效果不好，可用复合诱变剂来扩大诱变幅度，提高诱变效果。 （3）诱变剂量的选择 致死率取决于诱变剂量，而致死率和诱变率之间有一定的关系。因此可以用致死剂量来作为选择适宜剂量的依据。凡是能增加变异的幅度又能促使变异向正变范围移动的剂量就是合适剂量。确定合适的剂量要价格多次摸索，一般诱变效应随剂量的增大而提高，但达到一定的剂量后，再增加剂量反而会使诱变率下降。 （4）变异菌株的筛选