生化试验教材实验九：聚合酶链式反应.pptVIP

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2018-05-23 发布于天津
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生化试验教材实验九：聚合酶链式反应.ppt

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目录目录聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）实验九核聚变刘向华南京医科大学生化与分子生物学系 Nanjing medical university Department of biochemistry and molecular biology 实验目的掌握PCR实验的基本原理与操作方法理解PCR在分子生物实验技术中的重要性了解引物设计的一般要求实验原理基本原理：体外模拟体内的DNA复制 PCR体系模板DNA(template) 寡核苷酸引物(primer) DNA聚合酶(polymerase) 合适的缓冲液(buffer)系统 Mg2+ 目的基因或DNA片段在体外高效、快速、特异地扩增。单脱氧核苷酸(dNTP) PCR过程 DNA变性(denaturation)——DNA双链解链变为单链退火(annealing)——DNA复性，引物与模板结合延伸(extension)——引物沿5→3端延伸合成新链 1个循环(cycle) Plateau Effect in PCR Amplification PCR扩增的平台期实验步骤 1、反应体系的配制 ddH2O10×PCR反应缓冲液25mmol/L MgCl2 4种dNTP的混合试剂上游引物（Forward）下游引物（Reverse） Taq DNA聚合酶模板DNA(约1ng) 2μl 48μl 35.5μl5μl 3μl 2μl 1μl 1μl 0.5μl 50μl 2、PCR反应预变性 94℃ 5min 变性 94℃ 30s 退火 54℃ 45s 延伸 72℃ 45s 末次延伸 72℃ 3min 20-30 cycles 3、琼脂糖电泳观察结果 10μl PCR反应产物，加2μl上样缓冲液； 2%琼脂糖凝胶，90~120mA，电泳20~ 40min；紫外分析仪观察结果。负极正极实验结果 * * 目录