第2章 节 蛋白质化学 生物化学检验 .pptVIP

蛋白质 ‘+’ “-” 两性电解质 正负电荷相等时 溶液的PH值 PI 蛋白质离子 兼性离子 pH=pI +OH- pHpI +H+ +OH- +H+ pHpI 带电荷为零 带电荷为正 带电荷为负 完全质子化 完全去质子化 兼性离子 二、氨基酸的两性解离及等电点 (pK′1) (pK′2) 不同pH时氨基酸以不同的离子化形式存在！ PH=PI时，Pr电中性； PHPI时，Pr带“-”； PHPI时，Pr带“+” 思考： 人体蛋白质大多数带什么电？ 电泳时放哪一极？ 问题：有两蛋白质混合液，PI1=6.3 ， PI2=4.9 现欲分离两蛋白质，可否运 用电泳法？怎样才能分离效果最好？ (二) 蛋白质是亲水胶体 蛋白质为什么属胶体？ 真溶液 溶质颗粒直径 1nm 胶体溶液 溶质颗粒直径 1—100nm 悬浊液 溶质颗粒直径 100nm 稳定蛋白质胶体溶液的因素 (1) 表面电荷 (2) 水化膜 2.蛋白质的沉淀作用 如果加入适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层（消除相同电荷，除去水膜），蛋白质胶体溶液就不再稳定并将产生沉淀。 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化层 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 蛋白质的聚沉 蛋白质胶体溶液沉淀作用示意图 (三) 蛋白质的沉淀 蛋白质自溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。 沉淀方法类别: ① 高浓度中性盐（盐析） ② 等电点沉淀 ③ 有机溶剂沉淀 ④ 重金属盐类沉淀 ⑤ 生物碱试剂和某些酸类沉淀 ⑥ 加热变性沉淀 盐析(salt precipitation)是将高浓度硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐加入蛋白质溶液，使蛋白质表面水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 *分段盐析：调节盐浓度，可使混合蛋白质溶液中的几 种蛋白质分段析出。 例如：血清球蛋白（50%(NH4)2SO4饱和度）， 清蛋白（饱和(NH4)2SO4)。 蛋白质的凝固作用 (protein coagulation) 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。 组成Pr的AA共20种，都是α-AA(脯氨酸外)。 酸性氨基酸：天冬氨酸 谷氨酸 碱性氨基酸：赖氨酸、精氨酸、组氨酸  二 蛋白质的分子结构 任何一种蛋白质都是由20种氨基酸以不同 数量和不同顺序组合而成，并具有一定三维结 构，由此发挥其特有的生物学功能。 (一)肽键与肽 1、 肽键：一个AA的α-羧基与另一个α-氨基脱水缩合所形成的酰胺键。 + -HOH 肽键 NH - CH - C H OH O O H 甘 氨 酸 甘氨酰甘氨酸 CH3 NH2CH2COOH + HNHCHCOOH O CH3 NH2CH2C NCHCOOH H 2、肽  氨基酸殘基通过肽键连接所形成的 化合物 *两分子氨基酸缩合形成二肽，三分子氨基酸缩合则形成三肽…… *由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽(oligopeptide)，由更多 的氨基酸相连形成的肽称多肽(polypeptide)。 * 多肽链(polypeptide chain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而 成的一种结构。 R1 R2 R3 Rn H2N-CHCO—NHCHCO-NHCHCO- NHCHCOOH 氨基末端