第3章 生物化学基础与代谢工程 生物工程与技术 知识导论.pptVIP

* 流量分配率受严格的控制的一类节点。刚性节点下游分支的流量分配很难改变，除非对其相关分支途径中的各种酶动力学特性进行全方位的修饰。 代谢物P1和P2除了反馈抑制自身合成外，在异构酶作用下也对反向分支途径进行调控。减少P2分支途径流量会丧失了P2的激活作用，导致P1的合成率也会减少。 ② 刚性节点 试验表明，扩增P1途径的酶活性、解除P1 的反馈抑制、或者阻断P2的生成，节点N处流向P1分支途径的流量分割率均无影响。 * 流量分配由某一分支途径动力学控制的一类节点。半柔性节点在代谢途径中多见，这类节点的修饰比较容易。 占主导地位的分支途径称为优势分支途径(如图中N→P2)，催化优势分支反应的酶通常具有较高的活性，或者对节点代谢物呈现高亲和力。 ③ 半柔性(弱刚性)节点 流向优势分支途径的流量分配不受相应末端产物的反馈抑制调节，绝大部分的节点流量流入优势分支。 * 代谢工程的目的在于构建具有新的代谢途径、能生产特定目的产物或具有过量生产能力的微生物工程菌应用于工业生产。 根据微生物的不同代谢特性，代谢工程设计主要有以下三个途径： 代谢工程设计 A、改变代谢流 B、扩展代谢途径 C、构建新的代谢途径 改变代谢流是指改变分支代谢途径的流向，阻断其他代谢产物的合成，以达到提高目标产物产量的目的。 A、改变代谢流 改 变 代 谢 流 的 方 法 1) 加速限速反应 2) 改变分支代谢途径流向 3) 阻断与目标途径相竞争的代谢途径 4) 构建代谢旁路 5) 改变能量代谢途径 * ① 增加代谢途径中限速酶编码基因的拷贝数 ② 强化以启动子为主的关键基因表达系统 ③ 提高目标途径激活因子的合成速率 ④ 灭活目标途径阻遏因子的编码基因 1) 加速限速反应 * 首先确定代谢途径中的限速反应及其关键酶；然后将编码限速酶的基因进行扩增并转入宿主，增加在宿主中表达拷贝数以提高目的产物的产率。 如头孢霉素C的代谢工程菌的构建：克隆编码脱乙酰氧基头孢霉素C合成酶基因，导入顶头孢菌；所得转化子的头孢霉素C产量提高了25%。 ① 增加代谢途径中限速酶编码基因的拷贝数 * 重组质粒在受体细胞中的拷贝数并未增加，但强启动子的高效率可以促进转录，得到更多的关键酶分子。 将目的基因置于强转录活性的启动子控制之下或增强子附近，引起目的基因高表达。 ② 强化以启动子为主的关键基因表达系统 * 转录激活因子是生物体内基因表达的开关，它的存在和参与往往能触发相关基因的正常转录，因此提高激活因子的合成速率，从理论上能促进关键酶基因的表达。 ③ 提高目标途径激活因子的合成速率 * 去除具有反馈阻遏作用的某些因子或这些因子作用的靶位点，从而解除对关键酶的阻遏。 ④ 灭活目标途径阻遏因子的编码基因 2.1 维生素(vitamin) ：参与生物生长、发育和代谢，维持生物机体正常生命活动所必需的一类微量有机小分子物质。 2.2 维生素的命名和分类 1. 脂溶性维生素：A 、D、 E、 K 2. 水溶性维生素：B 族，C 2.3 脂溶性维生素 维生素A ( VA1，VA2 ) 维生素D (VD1，VD2 ) 维生素K (VK) 2、维生素与辅酶 一．维生素C (VC) 二．硫辛酸：硫辛酸乙酰转移酶的辅酶，有转酰基作用。 三．维生素B1与焦磷酸硫胺素 四．维生素B2与FMN，FAD 五．维生素B3 (泛酸)与辅酶A 六．维生素B5 (烟酸、烟酰胺) 与NAD 、NADP 七．维生素B6 及磷酸吡哆醛、磷酸吡哆胺 水溶性维生素与辅酶 3.1 激素的概念 1. 激素(hormone): 生物体内特殊组织或腺体产生，直接分泌到体液(血液、淋巴液、脑脊液、肠液)，通过体液运送到特定部位(靶细胞)，从而引起特殊激动效应(调节控制各种物质代谢或生理功能)的一群微量的有机化合物。 2. 激素分泌的几种方式：内分泌、旁分泌、自分泌 3.2 激素的分类 1. 含氮类激素：1）蛋白质多肽类；2）氨基酸衍生物 2. 类固醇激素 3. 脂肪酸衍生物 3、激素与细胞信号转导 3.3 激素的分泌 各分泌腺之间的上下级关系：下丘脑 → 垂体前叶 → 腺体 → 分泌外周激素；大脑皮层 → 肾上腺髓质 → 肾上腺素 胰腺：胰岛素、胰高血糖素 甲状腺：降钙素 甲状旁腺：甲状旁腺素 胸腺：胸腺素 胃肠道：促胃泌素、肠促胰液素、胰高血糖素、胃抑肽等 肾脏：肾素、促红细胞生成素 心脏：心房肽 脂肪组织：瘦素，16 kD 激素的分泌 3.4 部分激素的结构特征和生理功能 1) 肾上腺素 生理作用：肾上腺素的分泌直接受大脑皮层的控制，处于惊吓和紧张状态时分泌增多。可使