重组毕赤酵母工程菌产木聚糖酶酶学性质的研究.pdfVIP

2009年 第45卷 第3期 AnimalProduction·动物生产 重组毕赤酵母工程菌产木聚糖酶酶学 性质的研究 李富伟，汪 勇 ，汤海鸥 （挑战生物技术有限公司，北京 100081） 摘 要：采用DNS还原糖法研究基因工程菌毕赤酵母产木聚糖酶的酶学性质。结果表明：该木聚糖酶具有良好 的热稳定性；最适pH为4.5，在pH3.5~7.0条件下均能保持较高的酶学活性，且对不同酸碱pH环境具有较强的 耐受性；内源性蛋白酶对该木聚糖酶的活性影响较小；室温25℃下贮存 12个月，该酶活性保持在80%左右；在 4.0%仔猪预混料中贮存 12周，酶活存留仍达91.4%以上，表现出良好的贮存稳定性。 关键词：毕赤酵母；木聚糖酶；酶学性质 中图分类号：S816.79 文献标识码：B 文章编号：0258-7033（2009）03-0043-03 木聚糖是由 --1,4-木糖苷键连接起来并含 电子天平、精密pH计、恒温摇床、碘量瓶（100mL）、 有多种取代基的戊聚糖，是植物细胞壁半纤维素的 可控恒温水浴锅、722分光光度计、微量移液器。 [1] 重要组分 。由于单胃动物消化道内不能分泌用于 1.3 酶活测定 降解木聚糖的酶类，故难以将其消化利用；同时木聚 1.3.1 酶活单位定义 在37℃、pH5.5条件下，1min 糖本身具有较强的抗营养特性，限制了禾谷类饲料 从 1.0%燕麦木聚糖中释放 1 mol木糖所需的酶量 原料（如小麦、黑麦、大麦等）在饲料工业和畜牧业 即为 1个活性单位（U）。 生产中的应用。当前众多研究表明，添加木聚糖酶 1.3.2 酶活检测方法 DNS还原糖法。 能有效地消除饲粮中木聚糖的抗营养作用，改善饲 试验设计 料养分的消化利用率，提高动物生产性能，降低饲料 [2] 成本 。此外，木聚糖酶的开发利用在拓宽非常规饲 2.1 热稳定性研究 料资源的应用范围，缓解能量饲料资源的匮乏等方 2.1.1 干热稳定性 将木聚糖酶在不同温度下的 面也有积极的意义。 恒温烘箱中分别干热处理 1min或3min，测定其剩 本文研究了基因工程菌毕赤酵母所产木聚糖酶 余酶活。以未处理酶样品的活力为 100%，其余经过 的酶学性质，并从酶的热稳定性、酸碱耐受性、蛋白 处理的酶活力与之相比得到的百分比即为该酶的相 酶耐受性及贮存稳定性等几个方面来评估预测木聚 对剩余酶活。 糖酶的饲用效价，从而为饲用木聚糖酶的选择与应 相对剩余酶活(%)=(处理前酶活值/处理后酶 用提供可靠的数据参考，避免单纯依据标识的酶活 活值)×100 值来选择、应用木聚糖酶产品带来的不必要损失。 2.1.2 湿热稳定性 准确移取3mL缓冲液于100mL 容量瓶中，将其浸没在不同温度的水浴锅中，预热 材料与方法 5min，再准确称取 2.50g木聚糖酶倒入容量瓶（其 1.1 样品 木聚糖酶（10000U/g，北京挑战生物技 含水量约54.55%），摇匀，湿热处理3min，测定其剩 术有限公司