急性坏死性胰腺炎肠黏膜损伤质粒示踪细菌易位实验分析-experimental analysis of plasmid tracing bacterial translocation in intestinal mucosal lesion of acute necrotizing pancreatitis.docx

PAGE PAGE 10 英文缩写词表 英文缩写 英文全称 中文名称 ANP SAP IMD IBD BT SIRS MODS acute necrotizing pancreatitis severe acute pancreatitis intestinal mucosal damage intestinal mucosal barrier dysfunction bacterial translocation systemic inflammatory response syndrome multiple organ dysfunction syndrome 急性坏死性胰腺炎 重症急性胰腺炎 肠黏膜损伤 肠黏膜屏障功能障碍 细菌易位 全身炎症反应综合征 多器官功能障碍综合征 PT plasmid tracer 质粒示踪 DAO ET LPS SO TP diamine oxidase endotoxin lipopolysaccharide sham operation time point 二胺氧化酶 内毒素 脂多糖 假手术 时点 中文摘要 目的 采用质粒示踪技术观察ANP大鼠不同时点肠黏膜损伤细菌易位，探讨肠 黏膜损伤与细菌易位的相关性，为SAP肠源性感染评估及其防治提供理论依据和 实验基础。 方法 健康 SD 大鼠 n=70，随机（抽签法）分成 2 组:ANP 组（实验组，A 组）， n=40；SO 组（假手术组，S 组），n=30。A、S 组大鼠再分别按 3h、6h、12h、24h、 36h 时点随机分成 5 个亚组，A 组大鼠各亚组 n=8，S 组大鼠各亚组 n=6。A、S 两组大鼠喂饲示踪菌 PUC18 质粒大肠杆 DH-5α 每天 1 次（10 ml/kg）×2d，于 喂饲示踪菌第 2 天开始采集粪便标本×3d。将每次采集的粪便标本置放于含 100μg/L 氨苄青霉素的 LB 琼脂培养皿上培养，观察有耐药菌生长后即行细菌 扩增、质粒提取、酶切及酶切产物电泳。细菌扩增质粒提取酶切产物与示踪质粒 PUC18 酶切产物电泳条带相同证实示踪菌已定植。确认示踪菌定植后，A 组大鼠 逆行胰胆管匀速泵入 5%牛磺胆酸钠（0.1ml/100g，0.2ml/min）建立 ANP 模型， S 组大鼠开腹仅翻动十二指肠建立 SO 模型。两组大鼠均在建模后按 3h、6h、12h、 24h、36h 时点门静脉取血检测血 AMY、Ca2+、DAO、ET 浓度；观察腹腔大体情况； 切取小肠和胰腺组织 HE 染色行组织病理学检查并行组织病理学评分；肠系膜淋 巴结、腹水、门脉血、胰腺组织进行细菌培养及示踪菌的鉴定。 结果 （1）腹腔大体观察：A组大鼠随时点延长出现胰腺点片状出血、坏死， 大片皂化斑，血性、淡红色腹水，胃肠胀气、扩张；S组大鼠各时点均未见上述 改变。 （2）血AMY：A、S组大鼠比较：A组大鼠各时点血AMY浓度均高于S组各时点， P0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h，P0.05； ②A6h低于A12h、A36h， P0.05，A6h低于A24h，P0.05；③A12h低于A24h、A36h， P0.05；④A24h高于A36h，P0.05。S组大鼠组间各时点比较，无统计学差异， P0.05。 （3）血Ca2+：A、S组大鼠比较：A组大鼠各时点血Ca2+浓度均低于S组各时点， P0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h高于A6h，P0.05，A3h高于A12h、A24h、 A36h，P0.05；②A6h高于A12h，P0.05，A6h高于A24h、A36h，P0.05；③A12h 高于A24h、A36h，P0.05；④A24h高于A36h，P0.05。S组大鼠组间各时点比较， 无统计学差异，P0.05。 （4）胰腺组织病理学检查（HE染色）：A组大鼠：①A3h：胰腺组织轻度水 肿，腺泡细胞轻度肿胀，点状出血，少量炎症细胞浸润，腺叶结构正常；②A6h： 胰腺组织中度水肿，腺泡细胞肿胀明显，片状出血，较多炎症细胞浸润，腺叶结 构轮廓尚清晰；③A12h：胰腺组织水肿明显，腺泡细胞肿胀明显，片状出血及少 量坏死，大量炎症细胞浸润，部分腺叶正常结构消失；④A24h：胰腺组织水肿、 出血及坏死明显，大量炎症细胞浸润，大部分腺叶正常结构消失；⑤A36h：胰腺 组织大部分出血及坏死，大量炎症细胞浸润，腺叶正常结构基本消失。S组大鼠： 胰腺组织未见上述病理改变。 （5）小肠组织病理学检查（HE染色）：A组大鼠：①A3h：肠绒毛排列整齐， 轻度水肿, 无顶部上皮细胞脱落, 肠上皮下间隙正常，少量炎性细胞浸润；② A6h：肠绒毛中度水肿, 顶部上皮细胞一部分脱落,肠上皮下间隙扩大，较多炎性 细