脊髓背角cb1受体在神经病理性疼痛中的作用及机制分析-function and mechanism analysis of cb1 receptor in spinal dorsal horn in neuropathic pain.docx

中英文缩略词表缩略词英文全称中文全称ATPadenosinetriphosphate三磷酸腺苷CB1RCannabinoidreceptor1大麻素受体1CCIchronicconstrictioninjury坐骨神经缩窄性损伤CB2RCannabinoidreceptor2大麻素受体2[Ca2+]iintracellularconcentrationofCa2+细胞内钙离子cAMPCyclicadenosinemonophosphate环磷酸腺苷ddH2Odoubledistillatedwater双蒸水ECSendogenouscannabinoidsystem内源性大麻素递质系统EGTAethyleneglycol-bis(α-aminoethylether)-N，N，N’，N’-teraaceticacid乙二醇双α-氨基乙酸醚四乙酸NMDAN-methyl-D-asparateN-甲基-D-天冬氨酸PKAproteinkinaseA蛋白激酶ARVMrostralventromedialmedulla延髓头端腹内侧区TWLthermalwithdrawallatency热缩足反射潜伏期TNP-ATPpyridoxalphosphate-6-azophenyl-20,40-disulfonicacidor20-(or30)-O-(trinitrophenyl)adenosine50-triphosphateP2X受体拮抗剂脊髓背角CB1受体在神经病理性疼痛中的作用及机制研究中文摘要大麻素作为一种重要的神经活性物质，参与了机体的许多生理及病理过程的调节。近年研究发现，全身给予、鞘内注射或直接向炎性组织局部注射大麻素类物质，对各种急慢性疼痛、炎性疼痛和神经痛均有明显的镇痛作用。大麻素受体主要包括CB1受体(Cannabinoidreceptor1，CB1R)和CB2受体(Cannabinoidreceptor2，CB2R)两种亚型，与其内源性激动剂共同构成了内源性大麻素系统。近年研究表明，CB1R和CB2R在疼痛的调制过程中都发挥了重要作用，介导了大麻素类物质的镇痛效应。脊髓背角既是接受外周伤害性信息并向上位脑结构传递的中继站，又是调制伤害性信息传递的脑干下行抑制/易化系统的投射纤维的终止部位，对伤害性信息的传递和调制发挥着重要的作用。外周神经损伤后导致脊髓背角感觉神经元兴奋性增高是神经病理性疼痛的关键。免疫组化实验显示在外侧网状核和脊髓腰段背角都有大量CB1R分布，CB1R是否通过调节脊髓背角神经元的兴奋性从而影响伤害性信息的传递以及中枢痛敏的形成，尚不清楚。目的：观察脊髓背角神经元CB1R在神经病理性疼痛中的作用；阐明CB1R影响脊髓背角神经元的兴奋性及其机制。方法：8周龄雄性SD大鼠56只分为7组：①sham组(假手术组)，②CCI组(鞘内注射DMSO生理盐水)，③AM251+CCI组（鞘内注射10-8mol/LAM251），④~⑥CP55940（0.01，0.05，0.20mg/kg）+CCI组（鞘内注射0.01，0.05，0.20mg/kgCP55940），⑦AM251+CP55940+CCI组（预先鞘内注射10-8mol/LAM251，10min后给予0.05mg/kgCP55940）；每组8只。假手术组大鼠不进行鞘内置管，仅游离坐骨神经不结扎；其余各组大鼠在鞘内置管5天后行CCI术，术后分别鞘内给予各种药物。行为学检测（热痛阈测定）；形态学检测（免疫组织化学）；免疫印迹技术检测脊髓背角CB1R、PKA蛋白；培养脊髓背角神经元，激光共聚焦技术测定脊髓背角神经元[Ca2+]i。结果：（1）大鼠CCI术后1d即形成稳定的热痛敏，直到第14d热痛敏仍持续存在，TWL明显缩短；鞘内注射CB1R激动剂CP559400.05mg/kg可明显延长CCI大鼠TWL（P0.05）；CB1R拮抗剂AM251(10-8mol/L)可部分阻断CP55940的镇痛效果（P0.05）。免疫印迹实验结果显示，CCI组大鼠在术后7、14d术侧脊髓背角CB1R、PKA表达明显增加（P0.05）；鞘内给予CP55940可显著降低CCI大鼠的PKA表达（P0.05）；CB1R拮抗剂AM251显著降低了CCI大鼠的CB1R表达（P0.05），同时阻断了CP55940降低CCI大鼠PKA表达的效应（P0.05）。（2）ATP(50μmol/L)可导致脊髓背角神经元[Ca2+]i升高,是由P2X受体介导细胞外Ca2+内流所致;CP55940(1-100nmol/L)可抑制ATP(50μmol/L)引起的脊髓背角神经元[Ca2+]i增高，且呈现剂量依赖性；大麻素受体1（CB1R）选择性拮抗剂AM251（10μmol/L）可阻断CP55940对ATP引起的[C