第8章 吸附及离子交换 2011-5-5.ppt

(1) 阳离子交换剂 阳离子交换剂是在不溶性载体( carrier)上结合有中性pH下带负电荷的官能团(羧甲基或磺丙基基团) 。若将蛋白质吸附于阳离子交换树脂上，pH应低于蛋白质的等电点。 + - 阳离子交换剂图示 三角形代表负电荷的功能基团(活性基团)，如-SO3- 功能基团释放的反离子(活性离子)带正电荷，如H+ 不溶性载体，如树脂resin 阴离子交换剂是在不溶性载体(carrier)上结合有中性pH下带正电荷的功能团 (二乙氨基乙基或季氨乙基等)，释放的反离子带负电荷，若将蛋白质吸附于阴离子交换树脂上，pH应高于蛋白质的等电点。 (2) 阴离子交换剂 - + 阴离子交换剂图示 三角形代表正电荷的功能基团(活性基团)，如 -N+ (CH3)3 功能基团释放的反离子(活性离子)带负电荷，如OH- 不溶性载体，如树脂resin 常用的离子交换树脂 强酸性阳离子交换树脂：活性基团是-SO3H (磺酸基) 和-CH2SO3H (次甲基磺酸基)； 弱酸性阳离子交换树脂：活性基团有-COOH, -CH2COOH, C6H5OH等弱酸性基团； 强碱性阴离子交换树脂：活性基团为季铵基团，如三甲胺基或二甲基-?-羟基乙基胺基； 弱碱性阴离子交换树脂：活性基团为伯胺或仲胺，碱性较弱。 表8.4 四类树脂性能比较 阳离子交换剂 阴离子交换剂 强酸性 弱酸性 强碱性 弱碱性 活性基团 -SO3- -COO- -N(CH3)3 -NH2, NHR, NR2 交换离子 H+, Na+ H+, Na+ OH-, Cl- OH-, Cl- pH范围 1~14 7~14 0~14 0~7 盐的稳定性 稳定 同弱碱性 稳定 洗涤时易水解 交换速度 快 H型慢 快 OH型慢 再生 3~5倍 1.5~2倍 3~5倍 1.5~2倍 (1) 交换容量 教材P158 定义：交换容量(exchange capacity) 指单位质量的干燥离子交换剂或单位体积的湿离子交换剂所能吸附的一价离子的毫摩尔数(mmol)。 交换容量是表征离子交换剂交换能力的主要参数 。 2、离子交换剂性能评价 交换容量的测定 阳离子交换剂 转化为氢型 阴离子交换剂 转化为氯型 交换容量包含样品中的总蛋白量，而非仅仅是活性蛋白。 各种蛋白样品与树脂的交换容量是不同的，应分别测定。 离子强度的增加引起对交换剂上结合蛋白质位点的竞争，而降低交换容量，在解离中便利用逐渐加大离子强度的原理。 放大实验时，应适当留一定的结合空间。 (2) 滴定曲线 滴定曲线是全面评价、表征交换剂的重要参数。 方法：1g氢型(或羟型)交换剂 + ? mL 0.1mol/L NaOH or HCl + 水至50 mL(其中1支 + 50 mL 0.1 mol/L NaCl) ?静置24h (对强交换剂) or 7d(对弱交换剂) ? 测pH ? 作图 单位质量离子交换剂所加入的NaOH或HCl的毫摩尔数 几种典型离子交换剂的滴定曲线 1—强酸型， 2 —弱酸型， 3 —强碱型， 4 —弱碱型 滴定曲线意义 1st 强离子交换剂的交换； 2nd 弱离子交换剂的交换； 3rd 滴定曲线的转折点 交换容量； 4th 转折点数 交换基团的种类数； 5th 交换容量随pH的变化。 pH影响交换容量 弱阴离子交换剂的交换容量是随着pH的下降而增大； 弱阳离子交换剂的交换容量是随着pH的上升而增大； 强阴离子与强阳离子交换剂的交换容量与pH变化无关，因其完全呈解离状态，始终很高。 吸附与离子交换基本理论—学习要点 识记：影响吸附及影响离子交换选择性的因素。 理解：生物分离中常见的吸附等温线及离子交换过程的机理。 第三节 吸附与离子交换基本理论 一、吸附平衡理论 吸附平衡：当吸附剂与溶液中的溶质达到平衡时，其吸附量q与液相溶质浓度 c及温度有关。 当温度一定时，吸附量只和液相溶质浓度 c有关， q 与c之间的函数关系q=f (c)称为吸附等温线。 生物分离中常见的吸附等温线 教材P161 (2) 单分子层吸附等温线(langmuir) ： (3) 多分子层吸附等温线 (Freundlich) ： 线性吸附等温线(Henry) ： 指数型的Freundlich吸附等温线可以描述大多数抗生素、类固醇、甾类激素等在溶液中的吸附过程。 langmuir吸附等温线可以描述生物制品酶等蛋白在溶液中的吸附过程。 适应条件：在低浓度范围之内成立。当浓度较高时，上式无效。 二、影响吸附的主要因素 吸附剂的性质：比表面积、粒度大小、极性… 吸附质的性质：对表面张力的影响，溶解度，极性，相对分子量… 温度：影响扩散系数，吸附质的稳定性