CASE3基因治疗课件.pptVIP

原发性肝癌( P r i ma r y h e p a t i c c a r c i n o m a ， P HC ) 是常见的恶 性肿瘤之一。目前对 P H C主要治疗方法有手术治疗、 放疗、 化 疗以及综合治疗等， 然而治疗效果并不理想。随着分子生物学 和免疫学技术的发展， 基因治疗技术在肿瘤的治疗 中具有广阔 的前景。 肝癌的自杀基因（suicide gene）疗法，即药物敏感基因（drug sensitivity)疗法，分子化疗、病毒导向的酶解药物前体疗法（VDEPT）、基因导向的酶解药物前体疗法（GDEPT），是将病毒、细菌中特有的前药物转换酶基因——自杀基因导入到肿瘤细胞，自杀基因编码的特异性酶类将无毒的药物前体在肿瘤细胞内代谢成毒性产物达到杀伤肿瘤细胞的目的。 自杀基因治疗 自杀基因类型 单纯疱疹病毒—胸苷激酶基因（HSV—TK） 水痘带状疱疹病毒—胸苷激酶基因（VZV—TK) 大肠杆菌胞嘧啶脱氧酶基因（EC—CD） 单纯疱疹病毒—胸苷激酶基因（HSV—TK） 单纯疱疹病毒（herpes simplex virus）胸苷激酶（thymidine kinase）基因能特异性地将核苷类似物无环鸟苷（ACV）或丙氧鸟苷（GCV）单磷酸化，进而在肿瘤细胞内代谢成三磷酸GCV。这种高毒性的GCV是细胞DNA聚合酶的抑制子和DNA合成的终结子，使分裂的肿瘤细胞被杀伤。 水痘带状疱疹病毒—胸苷激酶基因（VZV—TK) 水痘带状疱疹病毒（varicella zoster virus）胸苷激酶，可将无毒的甲基嘌呤阿拉伯核苷（araMP）代谢成DNA酶的抑制物腺阿拉伯三磷酸（araATP），从而杀伤肿瘤细胞。 大肠杆菌胞嘧啶脱氧酶基因（EC—CD） 可将抗真菌药物5-氟胞嘧啶（5-Fc）转化为高细胞毒性的化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fu） 此外，还有大肠杆菌脱氧胞苷激酶（deoxycitidine kinase） 基因，大肠杆菌鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（gunaine phosphoribosyl transferase)基因等。 现状 其中研究最深入，应用最广泛的仍是HSV-TK/GCV系统，VZV-TK/araM系统，FC-CD/5-Fc系统。其中HSV-TK/GCV系统的抗肿瘤效能已在多种肿瘤的体外实验中得到确证。 自杀基因杀死肿瘤细胞的作用机制 1.直接杀伤作用 2.旁观者效应 3.诱导机体免疫 自杀基因的旁观者效应 现象：体外实验发现，转染HSV-TK（TK+)基因和 未转染HSV-TK（TK-）基因混合培养时，GCV不仅杀死TK+细胞，而且杀死TK-细胞。而且肿瘤细胞培养中只要有10%的TK+基因细胞就可使其他未转染HSV-TK（TK-）基因细胞同时被杀伤。 意义：只要少数的肿瘤细胞被转染自杀基因，就会对临近的肿瘤细胞产生广泛的杀伤作用（这样也可以减低对转染方法效率的要求，有很大的临床应用价值） 旁观者效应的途径 ①转导自杀基因的肿瘤细胞前体药物代谢产物可直接传递到邻近的细胞，使邻近的细胞死亡 ②转导自杀基因的肿瘤细胞的死亡是一种凋亡，细胞凋亡后凋亡小体能够转移一些毒性产物和自杀基因表达酶本身进入邻近的细胞，引起继发性的凋亡。 免疫介导作用 1.自杀基因诱导的细胞死亡,凋亡,坏死以及细胞核降解所释放出的大量细胞碎片,增强了机体对肿瘤抗原的递呈和T细胞的识别 2.递呈抗原活化的CD8+通过直接杀伤和指导中性粒细胞释放细胞因子来发挥最大的细胞毒作用 3.CD4+细胞的抗肿瘤记忆作用,共刺激分子B7,MHCⅠ类分子,NK细胞以及其他非特异性杀伤细胞也参与了自杀基因介导的抗肿瘤效应 自杀基因的载体 将自杀基因载体转导至肿瘤靶细胞所用载体是自杀基因疗法付诸于临床的一项关键技术。肝癌自杀基因疗法采用 ⑴重组逆转录病毒载体 ⑵腺病毒载体 重组逆转录病毒载体 逆转录病毒载体能携带外源基因整合到靶细胞基因组，实现目的基因持久稳定表达。 逆转录病毒载体只在分裂细胞中整合，因此对肝癌细胞相对带有靶向性，但它的转染滴度较低并有插入突变和激活癌基因的危险，所以不适合直接体内基因转导。 腺病毒载体 腺病毒载体能产生更高的病毒滴度及在体内外对肝癌细胞有较高的转染效率。不整合人宿主染色体基因组，安全性稳定。但是腺病毒载体在转染后会产生免疫反应进而降低转染效率进而限制重复使用。 基因转导与表达的靶向性 可以将自杀基因置于特异性转录调控序列之下，达到使自杀基因在肝 特异性表达癌组织 抑癌基因 P53基因 P27基因 P21基因 P16基因（MTS1 ） 甲状腺素