DNA的粗提取与鉴定实验课件.pptVIP

课题1 DNA的粗提取和鉴定 课题背景 通过制作DNA的双螺旋结构模型，模拟DNA 的复制，绘制DNA指导蛋白质的合成过程。同学们对DNA有了不少的了解。 请回答：DNA的基本组成单位和空间结构特点是什么？ 阅读教材P54，思考以下问题： 1.结合教材图5-1回答，DNA在NaCL溶液中的溶解度是如何变化的？如何利用这一特点控制DNA在盐溶液中的溶解或者析出？ 2.DNA对其它物质的溶解性和耐受性有什么特点？这些特点对DNA的提取和鉴定有何作用？ 1.利用DNA的溶解性 　　　DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 二、实验设计 选材　应选用DNA含量相对较高的生物组织，以便于降低实验难度，使得实验成功的可能性更大。 一般选用鸡血细胞做实验材料有两个原因。一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。 3.提纯　去除滤液中的杂质 　 　4.析出　析出DNA 　将处理后的溶液过滤，加入与滤液等体积、冷却的酒精溶液（体积分数为95%），静置2—3min，溶液中会出现白色丝状物，即粗提到的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，用滤纸吸去上面的水分。 　 5.鉴定 鉴定DNA 　取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管的溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。 操作提示 以血液为实验材料时，每100　mL血液中需要加入３g柠檬酸钠，防止血液凝固。 采用植物材料时加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。 二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 结果分析与评价 1.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？ * 普通高中课程标准实验教科书 生物选修1 生物技术实践 专题5 DNA和蛋白质技术 请设想：如果你要对DNA进行粗提取和鉴定，应该考虑哪些问题？ 1.提取：原理（提取的依据是什么？）---操作（如何设计正确的实验步骤？）---提纯（如何提高DNA的纯度？） 2.鉴定：原理（鉴定的依据是什么？） ---操作（如何设计正确的实验步骤？） ---现象（通过什么现象能够说明问题？） 一、提取DNA的方法 DNA在0.14mol/L的NaCL溶液中的溶解度最小；高于或者低于0.14mol/L时，DNA的溶解度 又逐渐加大。 DNA不溶于酒精溶液，某些蛋白能溶于其中，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 　 蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没影响，大多数蛋白质不能忍受60--80℃的高温，而DNA在80 ℃以上才变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 [小结]提取DNA的方法 利用DNA不溶于酒精溶液，某些蛋白能溶于其中的原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 2.利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 　蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没影响，大多数蛋白质不能忍受60--80℃的高温，而DNA在80 ℃以上才变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 思路：选材---提取---提纯---析出---鉴定 2.提取 破碎细胞，获取含DNA的滤液 思考：为什么在提取洋葱的DNA时在切碎的洋葱中要加入一定的洗涤剂和食盐？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 认真研究教材P55去除杂质的三个方案，对比三个方案的设计原理有什么不同？ 方案一是利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质；方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 嫩肉粉，又称松肉粉。这是一种能使动物性原料软嫩滑润，同时又不损伤肌纤维弹性的佐助料。嫩肉粉呈白色粉末状，为纯天然制品，它的主要成分是从番木瓜中提取的疏松剂——木瓜蛋白酶，它能将动物类原料结缔组织、肌纤维中的胶原蛋白及弹性蛋白适当分解，使部分氨基酸之间的连接键发生断裂，从而破坏它们的分子结构，大大提高原料肉的嫩度，并使其风味得到改善。 小资料 思考：1.DNA鉴定采用了什么实验方法？ 2.鉴定DNA的方法 ，除了用