DNA的复制--生科课件.pptVIP

DNA的复制 本章主要内容： 1、掌握中心法则的基本内容. 2、掌握与DNA复制有关的基本概念. 3、掌握参与DNA的复制的各种因素. 4、掌握DNA修复的基本方式. 4、了解基因突变的基本知识. 一、中心法则 描述遗传信息流动的方向. 原始中心法则的基本内容： DNA分子是遗传信息的原始携带者. 遗传信息由DNA分子经过转录传递给RNA分子， 再由RNA分子经过翻译传递给蛋白质分子的氨基酸顺序. 1、半保留复制的实验依据和意义. 2、双向复制:原核生物 原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制. 3、复制子的概念 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复 制子(replicon). 复制子是独立完成复制的功能单位. 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制 子的复制. 3、聚合反应的特点： ● DNA新链生成需引物和模板. ● 新链的延长只能沿着模板的5? → 3?方向进行. 引物酶： 复制是在一段RNA引物的基础上进行的，催化引物合成的是一种RNA聚合酶，它不同于催化转录过程的RNA聚合酶，因此称为引物酶。 引物酶合成的小的RNA片断称为“引物”，为DNA的合成提供 3’－OH. ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关. ? 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用. ? 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。 复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与；还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF). ? 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用. Thanks 端粒(telomere): 是指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构部分，通常膨大成粒状. 结构特点: ? 由末端单链DNA序列和蛋白质构成. ? 末端DNA序列是多次重复的富含G、T碱基的短序列. TTTTGGGGTTTTGGGG… 功能: ? 维持染色体的稳定性 ? 维持DNA复制的完整性 端粒酶(telomerase) 端粒酶RNA. 端粒酶协同蛋白. 端粒酶逆转录酶. 组成： 端粒酶的催化延长作用 爬行模型 DNA聚合酶复制子链 进一步加工 端粒维持着染色体的稳定。 端粒因细胞分裂而变短到一定程度时，细胞就 会死亡. 端粒破损会导致DNA变得脆弱、容易发生变异， 可能导致一些与衰老有关的疾病，如动脉硬化 和某些癌症. ● DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读 A：DNA-pol的外切酶活性切除错配碱基；并用其聚合活 性掺入正确配对的底物. B：碱基配对正确， DNA-pol不表现活性. 6、复制时，DNA分子的解链及DNA分子拓扑学变化. DNA分子的碱基埋在双螺旋内部，只有把 DNA解成单链，它才能起模板作用. 解螺旋酶：——利用ATP供能，作用于氢键，使 DNA双链解开成为两条单链 引物酶：——复制起始时催化生成RNA引物的酶. 单链DNA结合蛋白——在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整. 10 8 局部解链 ▼ DNA拓扑异构酶 解链过程中 正超螺旋的形成. 拓扑异构酶作用特点： 既能水解 、又能连接磷酸二酯键. 拓扑异构酶Ⅰ 拓扑异构酶Ⅱ 分 类 拓扑异 构酶Ⅰ 切断DNA双链中一股链，使DNA解链旋转不致打结；适当时候封闭切口，DNA变为松弛状态。 反应不需ATP. 拓扑异 构酶Ⅱ 切断DNA分子两股链，断端通过切口旋转使超螺旋松弛. 利用ATP供能，连接断端. 作用机制： ● DNA连接酶 DNA连接酶作用方式： 连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链. 功能： A、DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用. B、在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用. C、也是基因工程的重要工具酶之一. HO 5’ 3’ 3’ 5’ DNA连接酶 ATP ADP 5’ 3’ 5’ 3’ （一）复制的起始： 需要解决两个问题： 1. DNA解开成单链，提供模板。 2. 合成引物，提供3?-OH末端。 四、原核生物的DNA复制： E.coli复制起始点 oriC GATTNTTTATTT ··· GATCTNTTNTATT ··· GATCTCTTATTAG ··· 11