Duoflow introduction课件.pptVIP

向客户询问： 做什么方面的研究，蛋白、核酸或其他生物分子？ 是否做分离纯化，在纯化什么？ 现在使用什么填料/介质和仪器在做纯化？ 纯化方法是否需要梯度洗脱？ 怎么收集纯化的组分？ 使用什么检测器？ (紫外, pH, 电导)? 如果看到实验室里有层析仪器和层析柱，可思考如下问题： 是否是分子生物学实验室？ 经常采用重力流亲和层析纯化抗体或融合蛋白质 是否是生物工程实验室? 是否是药物开发、中试或制备生产? 采用大肠杆菌、酵母还是细胞表达重组蛋白质？ 是否采用亲和纯化标签进行重组表达和亲和纯化 (His-tag, GST, streptavidin)? 是否使用离子交换层析，分子筛层析进行分离纯化，采用哪种介质? 粗样品体积多大? 用多大的层析柱分离? 采用多少步纯化，最后精纯采用什么手段？ 现在主要使用什么层析产品? 如果实验室有以下设备或技术，该客户可能需要层析产品 有一台 iCycler或其他PCR仪 是否在做克隆? 下游做什么? PCR前的样品和PCR后的产物如何净化? ——Chelex 100 有一台芯片点样仪，如microarray 如何纯化蛋白质以将其点在胶片上? 做蛋白质结构分析——一级结构（蛋白质测序仪） 需要纯化蛋白质才能做结构分析! 正在做重组蛋白质的表达 在实验室里有重力柱或重力离心柱 在做蛋白质电泳 客户正在做层析的情况… 有 Bio-Rad 层析仪或泵 有 ?KTA Bio-Rad 填料或仪器! 有GE 填料或层析柱 有一套 HPLC系统  非常直观，易学 人性化界面，全自动操作 程序运行中可实施控制或修改 2 次击键进入操作: Browser? Run 观察样品情况,调节色普图和峰高度 or Go Do Something Else! 可6-step编程的蠕动泵 可以控制换向阀和分流阀 可以控制比例混合阀保证精确的梯度混合 EP-1 Econo Pump 主要特点： 双通道，双流向 流速范围 0.01-20 ml/min/通道 EM-1 检测器 与所有收集器兼容 与所有记录仪兼容 EP-1 + EM-1 + 2110 = 手动层析系统 EM-1 Econo UV Monitor 主要特点： 设计用于低压层析, luer 接头 254 nm (DNA) 和280 nm (蛋白质) 可单独使用控制，或连接到EP-1泵或记录仪上光学模块可移动，提高了使用的灵活性 前面板指示： 吸收值 灵敏度设置 灯的状态 主要特点： 双功能监控盐浓度梯度 电导模式- 以Siemens单位输出 可移动流动池，提高使用的灵活性 层析柱可直接即到流动池上 可与 EGP和EP-1泵使用 全自动亲和层析系统 Profinia 缓冲液选择 AVR9-8 SV5-4 SVT3-2 DuoFlow中高压层析系统 GE无3-2阀和5-4阀，只能配低压或高压的9-8阀，每个约2000USD 2xAVR9-8 实现8柱切换 DuoFlow中高压层析系统 DuoFlow中高压层析系统 配置：任何一种型号，包括DuoFlow 10/40，QuadTec 10/40,Maximizer 20/80， Pathfinder 20/80 再配一个SV5-4阀和一个SVT3-2阀以及一个T三通即可 注意：GE任何一款AKTA都不能做柱串联 柱串联 柱串联 DuoFlow中高压层析系统 应用： 1、去除血清中高丰度蛋白：IgG和HSA，以用于2D电泳分析 2、亲和层析如His/GST-tagged等重组蛋白与脱盐一步完成 3、离子交换，疏水和脱盐一步完成 资料：Tech note 5334 9、软件系统 DuoFlow中高压层析系统 软件系统 DuoFlow中高压层析系统 DuoFlow：1个程序1个窗口，模块化设计，界面直观友好，操作简便 方法运行中可更改 AKTA：1个程序4个窗口，不够直观，操作繁琐，整合GE层析柱库的方法编辑，很不方便 方法运行中不能更改，设计不够人性化 阀门由软件独立控制， 可以根据需求任意组合，具有无限的可能性 关于AKTA的气泡感应器（Air sensor) DuoFlow中高压层析系统 1、只能感应气泡，不能驱除气泡 2、如果溶液被泵抽干，泵将把气泡泵进层析柱致使柱子走空 3、由于泵的这种缺点，需要气泡感应器进行控制 DuoFlow： 1、泵不会把气泡打入层析柱中，AKTA则会把气泡打入层析柱 2、关于气泡的检测由软件的压力指示测出，如果在走柱子时压力不稳，例如低压柱从十几跳到5psi以下，或中高压柱时压力