hpv18 e2与il12联合核酸疫苗的免疫效果初步研究-preliminary study on immune effect of hpv 18e2 and il12 combined nucleic acid vaccine.docxVIP

目录常用英文缩写4中文摘要6英文摘要10论文正文131引言132材料152.1主要仪器设备及材料152.2主要实验试剂163方法183.1HPV18E2基因的扩增及琼脂糖电泳鉴定183.2HPV18E2原核表达载体的构建与鉴定203.3HPV18E2真核表达载体的构建与鉴定263.4pcDNA3.1(+)/E2在HeLa细胞中的表达283.5联合核酸疫苗的免疫接种303.6联合核酸疫苗的免疫活性测定324结果344.1HPV18E2原核表达载体的构建及其表达与鉴定344.2HPV18E2真核表达载体的构建及其表达与鉴定394.3联合核酸疫苗的免疫活性测定415讨论466结论49参考文献50附录52文献综述53发表及待发表论文61致谢62常用英文缩写缩写词全称中文名称AA/aaaminoacid氨基酸A450absorbanceat450nm450nm处吸光度BLASTbasiclocalalignmentsearchtool基本局部相似性比对搜索工具bpbasepair碱基对BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白CTLcytotoxiclymphocyte细胞毒性T淋巴细胞dNTPdeoxynucldeosidetriphosphate脱氧三磷酸核苷酸DMEMdulbecco′smodifiedeaglemedium达尔伯氏改良培养基DMSOdimethylslfoxide二甲基亚砜DNAdeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸DTTdithiothreitol二硫苏糖醇EBethidiumbromide溴化乙锭ECLEnhancedchemiluminescence增强化学发光EDTAethylenediamietetraaceticacid乙二胺四乙酸ELISAenzymelinkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验FITCfluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶IFN-γinterferon–γγ-干扰素IL-12interleukin-12白细胞介素-12IL-4interleukin-4白细胞介素-4IPTGisopropythio-β-D-galactoside异丙基-β-D-硫代半乳糖苷kD/kDakilodalton千道尔顿MHCmajorhistocompatibilitycomplex主要组织相容性复合体MTT3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-di-phenyltetrazoliumbromide3-(4,5-二甲基噻唑-2)2,5-二苯基四氮唑溴盐ODopticaldensity光密度PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSphosophatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PEGpolyethyleneglycol聚乙二醇PMSFphenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟PCRpolymerasechainreaction聚合酶链反应RNAribonucleicacid核糖核酸RNaseribonuclease核糖核酸酶rpmrevolutionsperminute每分钟转数RPMI-1640roswellparkmemorialinstitute1640mediumRPMI-1640培养基SDSsodiumdodecylsulphate十二烷基硫酸钠SIstimilationindex刺激指数TBStris-bufferedsalineTris缓冲盐溶液TETris/EDTAbufferTris/EDTA缓冲液TEMEDN,N,N’,N’-tetramethylethylenediamineN,N,N′,N′-四甲基乙胺ThhelperTlymphocyte辅助性T细胞(Th细胞)TrisTris-(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷WHOWorldHealthOrganization世界卫生组织HPV18E2与IL-12联合核酸疫苗的免疫效果初步研究硕士研究生：阳帆导师：万艳平教授中文摘要目的：构建人乳头瘤病毒18型(HPV18)E2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/E2，将其与IL-12真核表达载体pcDNA3.1(+)/IL-12联合免疫BALB/c小鼠，检测小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平，为HPV18诱发的宫颈癌治疗性核酸疫苗的研制奠定实验基础。方法：(1)用PRIMER5.0软件设计HPV18E2基因引物，PCR扩增E2基因，将其插入pGEX-6P-2载体，构建重组载体pGEX-6P-2