hterc cmyc和cdh13基因检测用于宫颈癌筛查的研究-study on hterc cmcc and cd h13 gene detection for cervical cancer screening.docx

重庆医 重庆医科大学博士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 缩写 英文全称 中文全称 ICC invasive cervical cancer 浸润性宫颈癌 CIN cervical intraepithelial neoplasia 宫颈上皮内瘤样病变 HPV human papillomavirus 人乳头瘤病毒 FISH fluorescence in situ hybridization 荧光原位杂交 SSC saline sodium citrate 柠檬酸钠缓冲液 PBS phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 DAPI 4,6-diamidino-2-phenylindole 4,6-二脒基-2-苯基吲哚 SCC squamous cell carcinoma 鳞状细胞癌 MS-HRM methylation-sensitive high-resolution melting curve 甲基化敏感性高分辨率熔解 曲线 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 ROC receiver operating characteristic 受试者工作特征 AUC the area under the curve 曲线下面积 1 hTERC、c-MYC 和 CDH13 基因检测 用于宫颈癌筛查的研究 摘 要 目的： 为了试图提高宫颈病变筛查的准确性，提供更多的筛查手段，并 筛选到有助于确定具有宫颈癌风险的生物标志物，本研究以宫颈癌及 癌前病变患者为研究对象，检测hTERC基因和c-MYC基因的扩增情况， 以及检测CDH13基因启动子甲基化率，分别探讨与评估它们用于宫颈 癌筛查的价值。 方法： 采用荧光原位杂交(FISH)技术，分别检测了宫颈正常、宫颈良性 病变、CIN1、CIN2、CIN3和宫颈癌六类对象的宫颈上皮脱落细胞的 hTERC基因和c-MYC基因的扩增情况。用甲基化特异性高分辨率熔解 曲线分析技术(MS-HRM)检测宫颈良性病变、CIN1、CIN2、CIN3和宫 颈癌五类对象的宫颈石蜡包埋组织细胞的CDH13基因启动子甲基化 率。实验数据采用秩和检验及ROC曲线分析，判断这些检查指标的筛 查效果。 结果： 1、hTERC基因筛查不同级别宫颈病变的诊断效果的AUC值均大于0.8， 表明hTERC基因能较好地筛查各级宫颈病变。例如：当hTERC基因异 常扩增率4时，筛查CIN1以上宫颈病变的敏感性为57.01%，特异性为 2 90.62%；当hTERC基因异常扩增率14时，筛查CIN2以上的宫颈病变 的敏感性为71.15%，特异性为84.87%。 2、与hTERC基因相比，c-MYC基因只有筛查CIN3以上宫颈病变的AUC 值大于0.8，但筛查其他几个级别宫颈病变的AUC值也在0.7以上。当 c-MYC基因异常扩增率6时，筛查CIN2以上的宫颈病变的敏感性为 69.23%，特异性为84.03%。当c-MYC基因异常扩增率10时，能较好地 筛查CIN3以上的宫颈病变， 敏感性为87.50%，特异性为76.77%。 3、筛查良性病变以上的宫颈病变时，细胞学检测优于基因检测。筛查 CIN1的宫颈病变时， hTERC基因与细胞学诊断的筛查效果比较没有 显著差异，细胞学诊断的筛查效果优于c-MYC基因的筛查效果。在筛 查CIN2的宫颈病变或筛查CIN3的宫颈病变时，它们的筛查效果相 同，无显著性差异。 4、筛查≥CIN2的宫颈病变时，两基因联合检测能提高筛查的特异度和 灵敏度，两基因联合细胞学诊断主要提高筛查的特异度，灵敏度变化 不大。筛查≥CIN3的宫颈病变及宫颈癌时，各种联合检测并不能明显 提高筛查的灵敏度与特异度。 5、良性病变组织中也可以检测到 CDH13 启动子甲基化， CDH13 基 因启动子甲基化率筛查不同级别宫颈病变的 AUC 值均 0.58 左右，筛查 效果差。 结论： hTERC基因及c-MYC基因可能是用于检测宫颈病变和癌变的有用 的标志物。CDH13甲基化检测能否作为一个宫颈病变早期诊断的分子 3 标志物还有待商榷和进一步研究。 关键词：hTERC，c-MYC，CDH13，癌前病变，宫颈癌 4 Detection of hTERC, c-MYC and CDH13 Genes for Cervical Cancer Screening ABSTRACT Objective In order to improve the accuracy of cervical lesions screening, to provide more screening met