il10基因干预对ccl4诱导的肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的作用研究-study on the effect of il10 gene intervention on hepatic sinusoidal capillary vascularization induced by ccl 4 in rats with hepatic fibrosis.docx

IL-10 基因干预对 CCL4 诱导的肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的作用研究中文摘要目的: 1.构建CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型，观察肝窦毛细血管化的形成过程。2.探讨IL-10基因干预对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的影响。 方法:1. 选用 56 只清洁级雄性 SD 大鼠，完全随机分为正常对照组（N 组），肝纤 维化模型组（M 组），N 组大鼠腹腔注射生理盐水 2ml/kg，M 组大鼠腹腔注射 50%CCl4-蓖麻油混合液 2ml/kg，均每周 2 次，共 8 周；分别于造模第 3 天、1 周、2 周、4 周、6 周、8 周处死大鼠，收集肝组织和血清备用。HE 染色、Masson 染色观察肝组织炎症及纤维化程度，放射免疫法检测血清中 HA 的含量，透射电 镜观察肝窦窦壁结构，S-P 免疫组织化学检测各组大鼠肝脏 CD31、LN、Col-IV 的表达。2．选用 30 只清洁级雄性 SD 大鼠,完全随机分为正常对照组（N 组），肝纤 维化模型组（M 组），rIL-10 质粒治疗组（I 组），空质粒对照组（P 组），造模方 法同前（N 组：生理盐水，M、I、P 组：50%CCl4-蓖麻油混合液）；从第 5 周开始， N 组和 M 组大鼠尾静脉注射林格氏液作为试剂对照， I 组大鼠尾静脉注射 pcDNA3-rIL-10 质粒，P 组大鼠尾静脉注射 pcDNA3.0 空质粒，均每周一次。所有 大鼠于实验第 8 周末处死，收集肝组织和血清备用。生化检测血清 ALT 和 AST 的含量，HE 染色、Masson 染色观察肝组织炎症及纤维化程度，放射免疫法检测 血清中肝纤维化相关指标（HA、LN、PCIII、Col-IV）的含量，透射电镜观察肝 窦窦壁结构，S-P 免疫组织化学检测各组大鼠肝脏 CD31、LN、Col-IV 的表达。结果: 1.肝脏病理组织学证实CCL4诱导的大鼠肝纤维化模型构建成功，肝纤维化早期炎症细胞浸润、肝细胞变性坏死明显，中后期以胶原沉积、纤维间隔形成为主， 仍见肝细胞变性坏死，炎症浸润不明显。2.透射电镜及免疫组化结果表明，在肝纤维化过程中，肝窦毛细血管化是逐渐形成的，LSECs失窗孔明显早于纤维间隔的形成，而肝窦内皮下基底膜出现在纤维间隔形成以后。3.经过IL-10基因干预后，与M组和P组比较，I组大鼠肝细胞变性坏死程度减 轻，中央静脉周围炎症细胞浸润减少，胶原纤维沉积明显下降。I组血清ALT、AST、 HA、LN、PCIII、Col-IV水平显著降低（P0.05），Masson染色显示肝组织胶原纤 维沉积明显减少（P0.05）；透射电镜显示I组肝组织内胶原纤维沉积较前减少， 变薄，有窗孔视野多见，BM变得不连续、不明显，甚至部分视野可见窗孔，未见 BM；免疫组化结果显示肝组织中CD31、LN、Col-IV表达显著降低（P0.05）。结论:rIL-10基因干预能显著改善肝组织的炎症及纤维化程度，部分逆转肝 窦毛细血管化的形成，IL-10抗肝纤维化作用与其能逆转、拮抗肝窦毛细血管化 这一途径有关。关键词：IL-10；基因干预；大鼠；肝纤维化；肝窦毛细血管化TheeffectofgeneinterventionofIL-10onsinusoidal capillarization of CCl4-induced hepatic fibrosis in ratsABSTRACTObjective:To establish the experimental rat hepatic fibrosis model induced by CCl4，then observe the process of sinusoidal capillarization。To investigate the effect of IL-10 on sinusoidal capillarization of CCl4-induced hepatic fibrosis in rats.Methods:Fifty-six SD rats were divided randomly into control group(group N),fibrosis model group(group M), Rats in group N were treated with 2ml/kg normal sodium twice a week for eight weeks via intraperitoneal injection,and rats in group M were treated with 2ml/kg a mixture of 50%CCl4 with castor oil twice a week for eight weeks