is201对 gl15神经胶质瘤细胞信号传导通路 fak rasmapk 的实验研究-experimental study of is201 on fak ras mapk, a signal transduction pathway of gl15 glioma cells.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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is201对 gl15神经胶质瘤细胞信号传导通路 fak rasmapk 的实验研究-experimental study of is201 on fak ras mapk, a signal transduction pathway of gl15 glioma cells

三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期： I内容摘要目的：人 GL15 神经胶质瘤细胞 FAK-ras/MAPK 信号通路是整合素 αvβ3 参与调控的信号转导通路之一，在胶质瘤细胞的众多生物学行为中起关键作用。IS201 为目前一种强力整合素 αvβ3 的拮抗剂，可特异性识别整合素 RGD 序列并与之结合，从而通过干扰整合素对其介导的信号传导予以影响。本实验着重研究 IS201 作用于 GL15 胶质瘤细胞表面的整合素 αvβ3 后，对该细胞 FAK-ras/MAPK 信号通路中重要蛋白的表达量以及磷酸化的影响，从而在一定程度上对肿瘤细胞的侵袭予以抑制，为肿瘤细胞的治疗提供帮助。方法：(1) 人工培养 GL15 神经胶质瘤细胞，将不同浓度(0mg/L 、20mg/L 和 40mg/L)的 IS201 加入 DMEM 培养液中。孵育 16 小时后收集样品、裂解物。(2) Western Blotting 实验：将样品行 SDS, 电转移于 PVDF 膜上，封闭液室温封闭，依次加入一抗（抗 FAK 多克隆抗体 1：1000 稀释；FAK 磷酸化抗体 1：1000；MMP-2 抗体 1：1000 稀释；ERK1/2 磷酸化抗体 1：1000 稀释）和辣根过氧化酶标记的羊抗兔二抗后显影，肌动蛋白作为蛋白质上样量的标定。(3)建立 Transwell 模型板，培养 12h，使细胞穿透 Matrigel 胶和 PET 膜上的微孔，达到 PET 膜的下表面。然后细胞固定、染色和侵袭细胞数的计算。结果：（1）不同浓度的 IS201 均可明显抑制 FAK 的表达（*P0.05）及 FAK 磷酸化（*P0.05），并且随着 IS201 浓度升高，其对 FAK 表达及其磷酸化的抑制呈增高趋势。（2）加入 IS201 的各实验组，ERK1/2 的表达明显降低（*P0.05），随着 IS201 浓度增加，其对 ERK1/2 表达的抑制呈增强的趋势。（3）不同浓度 IS201 对 MMP-2 的表达均有明显抑制作用（*P0.05），随着 IS201 浓度增加，其对 MMP-2 抑制作用呈增强趋势。（4）不同浓度下 IS201 对 GL15 细胞侵袭性均有抑制作用，随着 IS201 浓度增加，对其抑制作用呈增强趋势。结论：整合素 αvβ3 拮抗剂 IS201 对 GL15 神经胶质瘤细胞瘤信号传导通路 FAK-ras/MAPK 中的 FAK 的表达及其磷酸化、MMP-2 的表达、ERK1/2 的表达均表现为剂量性依赖性抑制关系，对 GL15 细胞的侵袭力有明显抑制作用。关键词：整合素αvβ3 GL15黏着斑激酶侵袭IS201AbstractObjective As we know,Integrin αvβ3 can regulates FAK-ras/MAPK singnal pathway that play a main role on biological behavior in GL15 glioma cell. IS201,as a potent antagonist of integrin αvβ3, can specifically recognize the RGD sequence and bind, thus to influence the integrin-mediated signal transduction. The main point of our experiement is to observe the influence of protein belonging to FAK-ras/MAPK singnal pathway expression and phosphorylation after IS2